FONAIAP DIVULGA > Colección > Número 22  Julio-Diciembre  1986

  FONAIAP   DIVULGA  No.  22                                                                                               Julio-Diciembre    1986


La Investigación del Virus en Cítricas en el Fonaiap
y el Servicio Nacional de certificación  de Plantas Cítricas

"La citricultura venezolana se ha desarrollado en base a la introducción de yemas o esquejes provenientes del exterior sin ningún control fitosanitario, por lo que siempre se sospechó que vinieron infectadas con virus o similares".

Ing. Agr. Edmundo E. Monteverde


 

Esas enfermedades reducen el vigor de los árboles, acortando su vida útil, y en consecuencia la producción, como es el caso de Psorosis. En otros casos impiden el uso de patrones que ser capaces de inducir alta producción y calidad del fruto como en el caso de las citranges Poneirus trifoliata Raf. x Citrus sinensis Osb. Troyer 'Carrizo' y el limón 'Cravo' Citrus limonia Osb que por su susceptibilidad a Exocortis y Xyloporosis , es necesario injertarlos con yemas libres de esos patógenos. Aun sobre un patrón tolerante como el limón 'Rugoso', el árbol de naranjo 'Valencia' reduce su vigor y producción cuando está infecta. do con Tristeza, Psorosis, Exocortis o Xyloporosis al compararse con árboles sanos (22).

La tristeza de los cítricos seca las plantas.


El desarrollo de la citricultura en Venezuela y la aparición de los métodos de detección permitió que gradualmente se confirmará la presencia dé algunos de esos patógenos en Venezuela.

En 1960, Knorr et al (3), comprueban por primera vez la presencia del virus de la tristeza de los cítricos en árboles de limón criollo, Citrus aurantifolia (Christm) swing y limón 'Meyer' Citrus meyerii Tan, usando plántulas de limón criollo como indicadoras para detectar la presencia del virus. Rondón et al en 1970 (21) señalan por primera vez la Petrificación del fruto o Impretratura en un árbol de grapefruit Citrus paradisi Macf, identificando positivamente la enfermedad con árboles de 'Marsh seedless'. Estrada y Malaguti en 1972 (2 ), también identifican la enfermedad conocida como Exocortis en árboles de lima de 'Tahiti', Citrus latifolia Tan, siguiendo un método propuesto por Moreira que consiste en injertar yemas como inóculo a las plántulas de limón 'Cravo' (6).

Con este antecedente, entre 1960-73 varios investigadores del FONAIAP intentan establecer un permitiera establecer las bases, para la creación de un Servicio Nacional de Certificación de Plantas Cítricas libres de Psorosis, Exocortis y Pyloporosis; y provenientes de árbol de conocida producción y calidad de fruta.

Entre 1974-76 se reúnen varias instituciones públicas y privadas con el objeto de promover la misma idea. De esas reuniones, se acuerda establecer un proyecto de investigación de virus en cítricas que permitirá crear un Servicio de Certificación. Asimismo, se concluye que la certificación es un derecho y un deber del Estado por lo que se establece que el FONAIAP debe ser el organismo encargado de llevar adelante esa investigación.

   En 1976 se comienza a dar los primeros pasos para el establecimiento de un proyecto de investigación de virus en cítricos, con el decidido apoyo de la Dirección de Sanidad Vegetal del Ministerio de Agricultura y Cría (MAC) y el Fondo de Desarrollo Frutícola.

   En 1977 se publica el proyecto (14) donde se hace una revisión bibliográfica de lo más importante que se había hecho hasta ese momento en virus en cítricas en diferentes áreas citrícolas del mundo.

Posteriormente, quedaron establecidas las líneas de investigación para lograr los objetivos propuestos, habiéndose dividido en cuatro actividades de investigación:

1. Estudio de la expresión de síntomas de Tristeza, Psorosis, Exocortis y Xyloporosis en plantas indicadoras:

2. Selección de clones de cítricos en el Campo Experimental del CENIAP y Valles Altos de Carabobo.

3. Evaluación de la presencia de Psorosis, Exocortis y Xyloporosis en los clones preseleccionados.

4. Obtención de clones de cítricos libres de virus o similares a través de la microinjertación de ápices in vitro.

 LOGROS ALCANZADOS

Estudio de la expresión de síntomas de Tristeza, Psorosis, Exocortis y Xyloporosis en plantas indicadoras de cítricas:

   El método más común que existe para la detección de virus o similares son las plantas indicadoras. Las Plantas indicadoras son variedades o clones de cítricos muy sensibles a uno de esos patógenos, en particular, donde inducen síntomas característicos fácilmente reconocible. Estas son plántulas (5-7 meses de edad) obtenidas a partir de semillas o injertando el indicador en un patrón vigoroso; a las cuales se inoculan injertándoles a cada planta pedazos de partes vivas del árbol en estudio como yemas, pedazos de corteza, pedazos de hojas, etc. Cada uno de estos virus requiere temperaturas favorables para la expresión del síntoma en la planta indicadora. Así Tristeza y Psorosis, son virus de temperaturas suave (18-25°C), y Exocortis y Xyloporosis de temperaturas calientes (27-35°C) (20).

Tristeza: El síntoma en árboles adultos puede asemejarse a otras enfermedades que estén afectando la raíz. El virus causa una obstrucción de los vasos del floema por donde circulan los materiales o savia elaborada por el follaje. A una planta afectada por Tristeza, le puede tomar años morir, o morir en forma rápida y violenta, dependiendo del grado de obstrucción del floema.

   Esos materiales elaborados por el follaje no van a alimentar las raíces, por lo que se dice que el árbol muere por hambre al ocurrir una pudrición de ésas. Este virus requiere temperaturas suaves para una mejor expresión del síntoma en el limón 'Criollo'. Por ello, bajo condiciones de umbráculo (sitio cerrado con tela plástica), escogimos la época del año donde las temperaturas son más bajas, especialmente durante la noche, para una mejor expresión del síntoma y por tanto, una mejor identificación de la enfermedad. Después de haberse inoculado con Tristeza un grupo de plántulas, en la séptima semana después de la inoculación, aparecieron los síntomas de Tristeza como son el acopamiento-amarillamiento de las hojas jóvenes y en la octava semana apareció el aclaramiento de las nervaduras  (9). Posteriormente se comprobó que la aparición del síntoma de Tristeza en el limón 'Criollo' puede variar entre 29-97 días después de la inoculación, dependiendo de la raza Tristeza presente (16). Además se constató la presencia de otros síntomas en el limón 'Criollo', no antes señalado en el país, como son el acopamiento de las hojas maduras, amarillamiento de las hojas maduras, hojas corchosas en las nervaduras, reducción de crecimiento y epinastía (16).

Psorosis -Concave gum: Los árboles adultos infectados con Psorosis presentan varios síntomas, pero el más común es un escamamiento de la corteza del tronco, acompañado a veces con formación de goma , Otras veces ocurre lo que se llama Psorosis alveolar, que son depresiones cortas, anchas y poco profundas  y la Psorosis Concava que son depresiones poco profundas y alargadas. En todo caso, la vida útil de un árbol de naranjo dulce o mandarino afectado por Psorosis se acorta y comienza a declinar generalmente entre los 10-15 años, que es el período más productivo. Este virus requiere para mejor expresión del síntoma en la planta  indicadora de naranjo dulce,  temperaturas constantes de 18-25°C. En vista de que bajo nuestras condiciones climáticas, es difícil lograr esas temperaturas, más menos constante se estudió el  uso de una cámara de crecimiento, que son salones completamente cerrados con iluminación y temperatura controlada para ello se construyó una cámara de crecimiento experimental donde se demostró la factibilidad de su uso (14). Posteriormente en esa cámara experimental se hizo un estudio de expresión del síntoma de Psorosis en  la planta  indicadora naranja dulce 'Hamlin' Citrus sinensis Osb. Aquí se demostró que es posible obtener síntomas de Psorosis o "flecking" en la planta indicadora en la sexta semana después de la inoculación con temperaturas constantes de 19+ + 0.50C (8) y hoja de roble (Oak leaf). Además se comprobó por primera vez en Venezuela la presencia del virus de la Psorosis de los cítricos.

Un tipo de Psorosis levanta la corteza del tronco y de  las ramas y  producen  un  exudado. El único  para  combatirla  es el uso  de yemas libres de este virus.

Exocortis: Esta enfermedad es causada por un microorganismo parecido a los virus y llamado viroide. Los árboles adultos infectados con Exocortis y en un patrón susceptible se ven afectados por una reducción del crecimiento y un abultamiento debajo de la línea de injerto acompañado de un escamamiento de la corteza.

En el estudio de la expresión del síntoma de Exocortis, hemos , usado d05 tipos de Cidro Ethrog, Citrus medica Engl, CENIAP-I y Arizona 86l-S-1 (7). El Cidro 'Ethrog Arizona 861-S-1' injertada sobre Citrus volkameriana, muestra un enrrollamiento de la hoja o epinastía entre la novena y décimo séptima semana después de la inoculación . Además, en el envés de la hoja aparecen grietas en la nervadura principal y necrosado hacia el ápice.

  Xyloporosis: Esta enfermedad afecta tanto al patrón como la variedad, dependiendo de la susceptibilidad, como es el caso del limón 'Cravo' Citrus limonia Obs. y el tangelo 'Orlando' Citrus reticulata Blanco x Citrus paradisi Macf o el del mandarino Criollo o 'Willow Leaf Citrus reticulata Blanco. El síntoma es la formación de crestas o salientes en la cara interna de la corteza, que se corresponden con depresiones en la madera. En el tronco se observa exteriormente depresiones. A medida que estas depresiones se acentúan el declinamiento de los árboles aumenta hasta que finalmente mueren. Para la detección de Xyloporosis, se ha usado como planta indicadora el mandarino 'Parson Special' injertada con Citrus volkameriana. Los síntomas se obtienen en dos años y medio (10). Esto se ha logrado bajo las condiciones climáticas del Campo Experimental del FONAIAP-CENIAP, Maracay, donde la temperatura media mínima y máxima es 14.8- 33.3°C. Los síntomas se caracterizan por la formación de goma en el punto de unión del patrón (C. volkameriana) con la variedad mandarino Parson Special.

Selección de clones de cítricas en los valles altos de Carabobo y Campo Experimental del CENIAP en Maracay.

Tratando de resolver el problema de la baja productividad de las plantaciones citrícolas en Venezuela, se inició un trabajo de preselección y selección de árboles por producción y calidad de fruta en los valles altos de Carabobo. La preselección de los árboles en el Campo se hizo tomando en cuenta ciertas características: que correspondieran a la variedad que se estaba seleccionando, mayores de lo años de edad, vigorosos y libres de cualquier síntoma externo de estar enfermos. En la primera pre-selección se escogieron 189 árboles, después de 5 años quedaron finalmente 148 árboles.

En el Cuadro 1, aparecen 32 árboles cítricos seleccionados en los valles altos de Carabobo y Campo Experimental del CENIAP. En ese cuadro se puede observar la producción promedio de 5 afios de registro de los cultivares de naranjo 'Valencia' (V A), 'Hamlin' (HA), 'Pineapple' (PA), 'Parson Brown' (PB), washington Navel' (WN) y 'Criollo Montero' (CM) los grapefruit Duncan (DO) y Marsh Seedless (MS); los tangelos C. reticulata Blanco x C. paradisi Macf, Orlando (TO), Nova (TN), Lima de Persia (PL) y el mandarino 'Dancy' (DA).

CUADRO 1. RENDIMIENTO PROMEDIO DE 5 AÑOS DE ÁRBOLES DE CÍTRICAS SELECCIONADOS EN LOS VALLES ALTOS DE CARABOBO Y CAMPO EXPERIMENTAL DEL CENIAP

Arboles Seleccionados N°

Rendimiento Promedio 5 Años Kg.

VA5C2925

298

VA6JI203

256

VA6JI105

256

VA6JI108

250

VA12A1208

313

VA12A0804

311

CM6E3602

277

CM6E3722

398

VA5A2701

281

VA5B1211

225

VA5B0713

197

VA5B2621

188

VA5B1221

186

VA5B1107

177

VA6G9423

217

VA6G1311

211

VA6G1323

198

VA6G9613

195

*PA6F1415

199

*WN6A0205

231

*WN6A1504

243

*WN6A1805

244

MS1B0202

250

DU1B0301

210

VA1B0409

66

HA1B0503

118

PA1B0708

109

PB1B0606

120

TO1B1204

131

TN1B1108

96

PL1B1402

52

DA1B1607

92

* X =promedio de 3 años

Evaluación de la presencia de enfermedades virales en árboles preseleccionados en los Valles Altos de Carabobo.

Simultáneamente con la selección de árboles, se condujo un trabajo de investigación para determinar el grado de infestación por Psorosis, Exocortis y xiloporosis. En el Cuadro 2, podemos observar que sobre un total de 148 árboles preseleccionados, el 18% apareció infectado con Psorosis, el 62,8% con Exocortis y el 28,4% con Xyloporosis.

CUADRO 2. EVALUACIÓN DE LA PRESENCIA DE PSOROSIS, EXOCORTIS Y XYLOPOROSIS EN 3 FINCAS DE LOS VALLES ALTOS DE CARABOBO. AÑO 1984.

LOTE

Psorosis

Exocortis

Xyloporosis

Pos.

Neg.

Pos.

Neg.

Pos.

Neg.

ARAGUITA

5A

5

7

12

0

8

4

5B

4

26

19

11

13

17

5C

1

20

12

9

3

18

Sub-Total

10

53

43

20

24

39

%

15,8

68.2

38

MONTERO

6A

  1

11

10

  2

0

12

6E

  0

16

  4

12

4

12

6F

  4

  1

  3

  1

3

  2

6G

  1

13

  7

  7

6

  8

6J

  2

19

11

11

3

18

Sub-Total

  8

60

34

34

16

52

%

11,7

23,5

LA  MAJADA

12A

0

17

16

1

2

15

Sub-Total

0

17

16

1

2

15

%

0,0

94,1

11,7

total

18

130

93

55

42

106

%

12,2

62,8

28,4

Obtención de clones de cítricos libres de virus o similares a través de la microinjertación de ápices.

La metodología empleada hasta hace poco para obtener plantas libres de virus en cítricos eran los clones nucelares. Como se sabe, la posibilidad de trasmisión de virus en cítricos a través de la semilla es muy reducida. Los clones nucelares son plantas asexuales provenientes de la semilla, por lo que son idénticos al árbol madre, a diferencia de las plantas sexuales que son resultados del cruce del polen con el óvulo de la flor. Sin embargo, los clones nucelares tienen ciertas desventajas: obtener un clon nucelar toma unos 15 años, los árboles son más espinosos, la calidad de la fruta es menor en los primeros años, y la producción es muy alternante,. es decir, años de alta producción y años de baja producción.

Murashige y et al, en 1972 (18) idearon la técnica de microinjertar el ápice de retoños de cítricos que contiene el meristemo o zona de crecimiento y unas hojitas rudimentarias para obtener plantas libres de virus. Sin embargo, el porcentaje de "peque" del ápice fue muy bajo, llegando apenas al 5-40%.

Es así como Navarro y et al, en 1975 ( 19) mejora la técnica al determinar las condiciones ambientales más favorables para el "peque", logrando llevarlo entre 30-50%. La microinjertación de ápices de cítricos in vitro como un medio de obtener plantas libres de "virus", consiste en microinjertar patrones de cítricos de 10 días de edad que han estado creciendo en la obscuridad en un medio de agar nutritivo. El ápice de 0.14-0.18 mm., se coloca en una T invertida en la base del tallito cortado de la planta y dejado de 1.5 cm. de altura. Después que el patrón es microinjertado se coloca en un tubo de ensayo con una solución nutritiva y sobre un soporte hecho con papel de filtro.  Cuando la nueva planta tiene 5 semanas de edad o 2-3 hojitas , ésta se trasplanta a potes para su crecimiento y desarrollo. Sin embargo, nosotros acostumbrados a injertar esa nueva planta en un patrón vigoroso de vivero como es Citrus volkameriana. En esa forma logramos un desarrollo mucho más rápido de las plantas producidas a través de la microinjertación. Así hemos logrado producir plantas cítricas libres de Psorosis, Exocortis, provenientes de árboles de buenos productores (12). Las pruebas de Xyloporosis están en desarrollo, por lo que esperamos que para el próximo año comenzaremos a distribuir a los viveros que están inscritos en el Servicio Nacional de Certificación de Plantas Cítricas (SENACAC), yemas libres de esos virus y provenientes de árboles altamente productivos.

El Servicio Nacional de Certificación de Plantas Cítricas (SE- NACAC):

En el año de 1976 FONAIAP inició un Proyecto de Investigación sobre virus en cítricas que tenía entre sus objetivos, obtener plantas libres de virus, desarrollar un Banco de Germoplasma. De esta manera, se dieron los primeros pasos en materia de investigación que conducirían a la creación de un Servicio de Certificación de Plantas Cítricas Libres de Virus. En 1979 se nombró una comisión que se encargó de promover el control fitosanitario del cultivo, y como resultado de sus estudios el Ministerio de Agricultura y Cría resolvió, según Gaceta Oficial 32047 del 14 de agosto de 1980, crear el Servicio Nacional de Certificación de Plantas Cítricas SENACAC, quedando como responsable de su conducción el FONAIAP y la Dirección de Sanidad Vegetal del MAC. Posteriormente, se publicaron otras resoluciones sobre las tarifas de cobro por prestación del Servicio (Gaceta Oficial 32677 del 3 de marzo de 1983) y las normas del funcionamiento del SENACAC (Gaceta Oficial 32688 del 8 de marzo de 1983), que abren las perspectivas para un desarrollo moderno de la citricultura en Venezuela. Las normas de funcionamiento del Servicio, establecen tres elementos básicos, a través de los cuales los viveristas producirán las plantas certificadas (1)

Bloque de Fundación: Es un huerto de árboles cítricos ubicado en el FONAIAP-CENIAP en Maracay, constituido por árboles de la mejor producción y calidad de fruta y libres de "virus", cuyo fin es preservar el material parental y fundar los Bloques de Árboles Registrados.

Bloque de Árboles Registrados: Son huertos fundados a partir del Bloque de Fundación y ubicado en los viveros.

Bloque de Propagación: Son huertos establecidos a partir del Bloque de Fundación y Árboles Registrados situados en el vivero y con carácter transitorio, por un período máximo de 3 años.