Planta de Tangelo Orlando injerta sobre Citrus volkameriana, a la cual se la injertan chapas de corteza de la planta sospechosa con el viroide causal de Xiloporosis. Nótese el oscurecimiento de las hojas y las dos podas realizadas, bajo la axila de las cuales se forman bolsas de goma.

Enfermedad	Planta	Síntomas
VIRUS
Tristeza	Naranja dulce	Aclaramiento de nervaduras.
		Amarillamiento de hojas.
		A Muerte de plantas.
		Reducción de la producción.
Psorosis	Naranja dulce	Escamas en corteza de tronco y/o ramas principales.
		Clorosis de hojas.
		Reducción de la producción.
Petrificación	Naranja Harnlin	Bolsas de gomas en el albedo del fruto.
		Protuberancias en relieve, duras al tacto, en los frutos.
		Disminución de la producción
		Caída de frutos.
VIROIDES
Exocortis	Lima Tahiti	Exudados gomosos
		Rajaduras longitudinales
		Reducción de la producción
Xilosporosis	Mandarina criolla	Depresiones en el leño del tronco.
		Bolsas de goma.
		Amarillamiento de hojas.
		A Reducción de la producción.

a. Planta  Indicadoras
Patógeno	Indicador
Tristeza	Limón criollo
Psorosis	Naranja dulce Hamlin, mandarina común o naranja agria
Petrificación	Grapefruit, proveniente de semilla
Exocortis	Cidra Ethrog Arizona 861-5-1 injertado sobre Citrus volkameriana Gynura aurantiaca, Petunia spp.
Xilosporosis	Tangelo Orlando o Mandarina Parson Special injertada sobre C. volkameriana.

b. Pruebas serológicas. 

Se han utilizado para la detección del virus de la Tristeza. Estas pruebas se denominan:   a) anticuerpos fluorescentes; b) inmunodifusión con SDS, c) ELISA y d) microprecipitación. Estas pruebas u otras no se utilizan para la detección de Psorosis, dado que no se ha podido preparar un antisuero contra este virus. En el caso de los viroides de la Xilosporosis y Exocortis no ha sido posible el uso de las pruebas serológicas, dado que estos patógenos carecen de cubierta proteica. Actualmente, la prueba serológica más difundida es la de ELISA.

c. Electroforesis

Esta técnica se ha utilizado en la detección de Exocortis, mediante geles de poliacrilamida, por ser este viroide un RNA de peso molecular bajo. 

d. Microscopía electrónica

Esta técnica se ha utilizado en la detección de Tristeza, utilizando preparaciones parcialmente purificadas. Es un método que requiere un equipo de costo muy alto y es de baja sensibilidad en el diagnóstico del virus en ciertos cultivares.

 

PRINCIPIOS BÁSICOS DE SEROLOGÍA 

Si un animal de sangre caliente es infectado con un agente que causa enfermedad, tal como una bacteria o un virus, aparecen en su sangre, como respuesta a la infección, proteínas del tipo de las globulinas. Estas proteínas son denominadas anticuerpos y el agente estimulador de su producción, que es combinado con ellos "in vitro" se denomina antígeno.

Un animal puede producir anticuerpos no solamente en respuesta a la infección con un agente causante de enfermedad, sino también con una gran cantidad de materiales extraños, generalmente proteínas y polisacáridos. El suero que contiene anticuerpos puede ser separado del animal y se le denomina antisuero, mientras que al suero proveniente de un animal, al que nunca se le ha inyectado un material antigénico, se le denomina suero normal. Cuando el antisuero es apropiadamente preparado, es tan específico que sólo reacciona con el virus (antígeno) que indujo la producción de anticuerpos. Con el fin de producir antisueros específicos para un determinado virus, éste debe ser inyectado al animal (generalmente un conejo) que se inmuniza en forma pura y no alterada, para lo cual el virus debe ser purificado por cualquier método que demuestre ser eficiente.
La vía (intramuscular, subcutánea, etc.) y el número de inyecciones, el intervalo entre las mismas y la cantidad de virus que debe inyectarse a un animal, con el fin de obtener antisueros con alta concentración de anticuerpos (títulos altos) varía con el virus, el animal que se ha de inyectar, etc.

Cuando los anticuerpos y el antígeno se juntan in vitro ocurre una reacción. Esta reacción puede ser observada de diferentes formas dependiendo del método empleado y constituye la base de las pruebas serológicas.

USOS DE LAS TÉCNICAS SEROLÓGICAS

Las pruebas serológicas para los virus de plantas se realizan con varios propósitos, de los cuales los siguientes son los más importantes:

1. Para chequear presencia de virus en plantas, como por ejemplo en estudios de diagnóstico y detección de los mismos en programas de semillas.

2. Para determinar el grado de relación antigénica entre las partículas de diferentes virus o aislamientos de los mismos.

3. Para determinar la cantidad de nucleoproteínas de los virus o de proteínas en una preparación.

4. Para localizar virus en tejidos o células.

5. Para proporcionar información sobre la estructura de las partículas de los virus.

ELISA

El término ELISA es un acrónimo formado de Enzyme-Linked-Inmunosorbent Assay. Es el método aerológico más difundido actualmente, dado su alta sensibilidad, rapidez y permite estimar cuantitativamente al virus.

Esta técnica consiste básicamente en la retención de partículas de virus por anticuerpos absorbidos a placas plásticas de microtitulación y la revelación colorimétrica de la presencia de esas partículas por anticuerpos conjugados a una enzima. Puesto que una pequeña cantidad de enzima puede hidrolizar una cantidad mayor de substrato, la reacción se ve así amplificada y por ello aumenta la sensibilidad de la técnica. La hidrólisis del substrato da lugar a un cambio de color de la solución y esto permite determinar los resultados visualmente o cuantificarlos por medio de un colorímetro (Fig. 1). Existen varias modificaciones de ELISA, el utilizado en la detección de Tristeza es el método original (directo) el cual fue denominado de doble anticuerpo o "Sandwich".