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| FONAIAP DIVULGA > Colecci�n > N�mero 41 Julio-Diciembre 1992 |
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FONAIAP DIVULGA No. 41 Julio-Diciembre 1992 |
Bacterias Fitopat�genas en Cultivares de Patilla En siembras comerciales de patilla, en el oriente de Venezuela se detect� alta incidencia de pudrici�n de los frutos en plantaciones j�venes de la variedad 'Charleston Grey'. La enfermedad Caus� p�rdidas elevadas en Soledad, distrito Independencia, estado Anzo�tegui. Mediante pruebas fisiol�gicas y bioqu�micas, utilizando medios diferenciales, se determin� que se trataba de una bacteria Erwinia del grupo amylovora. Nubia Cabrera S. Investigador FONAIAP. EE. Anzo�tegui, El Tigre |
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El cultivo de la patilla (Citrullus vulgaris) reviste gran importancia econ�mica en la regi�n oriental del pa�s. El estado Anzo�tegui, en los �ltimos a�os ha incrementado la superficie sembrada con dicho cultivo; sin embargo, las plantaciones de varias localidades de la regi�n se han visto afectadas por una enfermedad cuyos s�ntomas consisten en la marchitez de las hojas y una mancha acuosa o aparentemente aceitosa de color verde oscuro, que aparece luego en la superficie del fruto. Esta enfermedad ha ocasionado p�rdidas econ�micas elevadas en siembras comerciales ubicadas en la localidad de Soledad, distrito Independencia, lo cual motiv� la realizaci�n del presente trabajo, con la finalidad de identificar el agente causal de la misma. Obtenci�n de muestras Las muestras, en su mayor�a, fueron tra�das al laboratorio por los productores con plantaciones afectadas, para su respectivo an�lisis fitopatol�gicos. Otras, fueron recolectadas en vistas realizadas a siembras afectadas. Aislamiento De frutos enfermos se cortaron peque�as secciones de tejido, fueron desinfectadas con alcohol al 70% y lavadas sucesivamente con agua destilada est�ril, previa siembra directa en cajas de Petri, con medio agar-papa-dextrosa. Las cajas fueron incubadas por 48 horas a 27�C. Adicionalmente, trozos del mismo tejido fueron triturados en un mortero con agua destilada fueron de una c�mara de aislamiento y se dejaron por 10 minutos. Posteriormente, ansadas del material mercado as� obtenido, se sembraron en cajas de Petri con nutriente agar (Difco). Las cajas con la siembra fueron incubadas a 27�C por 48 horas. Con la finalidad de saber c�mo se presentan los s�ntomas de la bacteria en la planta de patilla se realiz� un ensayo con semillas provenientes del suelo original de la plantaci�n en la cual se detect� la enfermedad.
Se utiliz� un dise�o de bloques al azar con cuatro tratamientos y cuatro replicaciones. Los tratamientos fueron:
Pruebas de patogenicidad Frutos de patilla de la variedad 'Charleston Grey', aparentemente sanos, se inocularon con una suspensi�n de bacterias de 1 ,5 x 108 c�l. bact/ml, mediante dos m�todos: 1. Se realizaron punciones en la superficie del fruto con una aguja descartable est�ril No.22 y se le coloc� la suspensi�n por aspersi�n en esa zona. 2. Se seccion� un pedazo de la superficie del fruto abriendo una ventana y se coloc� dentro de la suspensi�n de bacterias; luego se cubri� con el pedazo seccionado anteriormente. Los frutos inoculados se mantuvieron en condiciones de c�mara h�meda por 72 horas a temperatura de 28�C 2�C. Identificaci�n del agente causal La identificaci�n del agente causal se bas� en la determinaci�n de caracter�sticas culturales de las colonias: borde, elevaci�n, consistencia, color y transmisi�n de luz; caracter�sticas morfol�gicas de la c�lula bacteriana: forma, presencia de flagelo y reacci�n de Gram, y caracter�sticas fisiol�gicas. La enfermedad aqu� estudiada se present� en condiciones de alta humedad y temperatura, comprendidas entre 24 y 32�C. Con los m�todos utilizados se logr� aislar repetidas veces una fitobacteria. El m�todo del macerado de tejido enfermo result� m�s efectivo porque indujo mayor rapidez de crecimiento de las colonias y facilit� la purificaci�n. La sintomatolog�a desarrollada en los frutos inoculados en el laboratorio coincidi� con la manifestaci�n en el campo en la etapa culminante de la mancha, en la superficie del fruto (Fotos 2 y 3), donde se re aisl� nuevamente la bacteria y se constat� la presencia de la misma. Los resultados obtenidos en cuanto a caracter�sticas culturales, morfol�gicas y fisiol�gicas de la bacteria en estudio, se resumen como sigue:
Caracter�sticas culturales, morfol�gicas y fisiol�gicas de Erwinia, agente causal de la marchites bacteriana en cucurbit�ceas (patilla - Citrullus vulgaris). Caracter�sticas culturales Color: crema Bordes: enteros. Caracter�sticas morfol�gicas Prueba de Gram: positiva. Caracter�sticas fisiol�gicas Colonias amarillas en agar YDC: positivo Crecimiento en medios comunes: positivo Fluorescencia en medio BKing: negativo Crecimiento en medio CVP: positivo Crecimiento anaer�bico: positivo
Crecimiento
a 33 -34�C: positivo El resultado de la prueba de Gram, la ubica como bacteria fitopat�gena. La prueba en soluci�n de KOH al 1 %, la cual result� positiva, elev�ndose una mucosidad desde el portaobjeto a los 30 segundos, unida a los resultados de las siguientes pruebas: Colonias amarillas en agar YDC: positivo Pigmentos fluorescentes en medio BKing: negativo Prueba de H2S Cyste�na: positivo permiten ubicar la bacteria como Erwinia. El resultado de la prueba del crecimiento anaer�bico, el cual result� positivo, permite ubicar la bacteria dentro del grupo Amylovora. Caracter�sticas culturales. morfol�gicas y fisiol�gicas de Erwinia amylovora, agente causal de la marchitez bacteriana en cucurbit�ceas (patilla-Citrullus vulgaris) En el ensayo para detectar los primeros s�ntomas producidos por la bacteria, a los 22 d�as de la siembra, se observaron puntos o manchas circulares de color oscuro en las hojas inferiores; estas manchas fueron aisladas y sembradas en PDA luego de ser desinfectadas, observ�ndose la presencia de la bacteria de donde fue aislada nuevamente. Lotes de semilla original de esta variedad de patilla han sido analizados, encontr�ndose que la bacteria viene en la semilla y su diseminaci�n, aparentemente, se realiza por la soca de los a�os anteriores y de lotes de semilla de fruto sano en apariencia. Es importante se�alar que siembras de 150 ha de patilla han reportado un 80% de p�rdidas. La enfermedad se observa en el fruto despu�s de los 55 d�as; es decir, unos diez d�as antes de que la maduraci�n alcance el estado �ptimo (Foto 4). La bacteriosis ha sido detectada en la zona oriental desde septiembre del a�o 1989, en la localidad de Soledad. Seg�n la bibliograf�a consultada (8), esta bacteria que se conoce en Estados Unidos y norte de California, es diseminada por insectos del tipo cole�ptero, en sus estados larvario y adulto, ya que despu�s que ellos muerden una planta infectada la bacteria se reproduce en el tracto digestivo del animal y la disemina por las heces, encima de las hojas de las plantas. La bacteria no permanece en el tejido muerto de las hojas de la planta enferma, siempre se encuentra en hojas j�venes. Las pruebas con el insecto no se han podido concluir. Se requiere que estas investigaciones se contin�en, ya que esta enfermedad ha repercutido en cuantiosas p�rdidas econ�micas en el oriente del Venezuela. Bibliografia. 1. AGRIOS, G.N. 1978. Plant pathology. 2nd. ed. Academic Press, New York. 703 p. 2. BACTERIOLOGY COMITEE OF AMERICAN PHYTOPATOLOGICAL SOCIETY. 1980. Laboratory guide of identifica tion of plant pathogenic bacteria. NW. Shaad. Ed. Univer- sity of Georgia. Experimental Station. G. A. 69 p. 3. BUCHANAN, R.E. and GIBBON, N.E. 1974. 8ergey's manual of determinative bacteriology. 8th. ed. The Williams and Wilkins, Co., 8altimore, Md., USA. 1472 p. 4.HARRIS, H.A. 1940. Comparative wilt induction by Erwinia tracheiphila and Phytomonas stewartti. Phytopatology 30: 625-638. 5.NUTTAL. V.W. yJ. J.JASIMN. 1958. The inheritance of resistence to bacterial wilt (Erwinia tracheiphila E. F, Smith, Holland) in cucumber. Can. J. Plant Sci. 38: 401-404. 6. PREND. J. y C.A. JOHN. 1961. Method of isolation of Erwinia traheiphila and an improved inoculation technique. Phytopathology 51 : 255-258. 7. STARR, M. 1983. Phytopathogenic bacteria springer - Verlag. New York, USA. 8. WALKER, J.C. 1975. Patolog�a vegetal (Plant Pathology. 3er. ed. 1965). Trad. A. Aguirre Azpeitia. Ediciones Omega. Barcelona, Esp. 818 p. 9. WATTERSON, J.C. y col. 1972. Multiplication and movement of Erwinia tracheiphila in resjstant and susceptible cucurbits. Plant. Dis. Reptr. 56: 949-952. |
