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| FONAIAP DIVULGA > Colección > Número 41 Julio-Diciembre 1992 |
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FONAIAP DIVULGA No. 41 Julio-Diciembre 1992 |
Bacterias Fitopatógenas en Cultivares de Patilla En siembras comerciales de patilla, en el oriente de Venezuela se detectó alta incidencia de pudrición de los frutos en plantaciones jóvenes de la variedad 'Charleston Grey'. La enfermedad Causó pérdidas elevadas en Soledad, distrito Independencia, estado Anzoátegui. Mediante pruebas fisiológicas y bioquímicas, utilizando medios diferenciales, se determinó que se trataba de una bacteria Erwinia del grupo amylovora. Nubia Cabrera S. Investigador FONAIAP. EE. Anzoátegui, El Tigre |
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El cultivo de la patilla (Citrullus vulgaris) reviste gran importancia económica en la región oriental del país. El estado Anzoátegui, en los últimos años ha incrementado la superficie sembrada con dicho cultivo; sin embargo, las plantaciones de varias localidades de la región se han visto afectadas por una enfermedad cuyos síntomas consisten en la marchitez de las hojas y una mancha acuosa o aparentemente aceitosa de color verde oscuro, que aparece luego en la superficie del fruto. Esta enfermedad ha ocasionado pérdidas económicas elevadas en siembras comerciales ubicadas en la localidad de Soledad, distrito Independencia, lo cual motivó la realización del presente trabajo, con la finalidad de identificar el agente causal de la misma. Obtención de muestras Las muestras, en su mayoría, fueron traídas al laboratorio por los productores con plantaciones afectadas, para su respectivo análisis fitopatológicos. Otras, fueron recolectadas en vistas realizadas a siembras afectadas. Aislamiento De frutos enfermos se cortaron pequeñas secciones de tejido, fueron desinfectadas con alcohol al 70% y lavadas sucesivamente con agua destilada estéril, previa siembra directa en cajas de Petri, con medio agar-papa-dextrosa. Las cajas fueron incubadas por 48 horas a 27°C. Adicionalmente, trozos del mismo tejido fueron triturados en un mortero con agua destilada fueron de una cámara de aislamiento y se dejaron por 10 minutos. Posteriormente, ansadas del material mercado así obtenido, se sembraron en cajas de Petri con nutriente agar (Difco). Las cajas con la siembra fueron incubadas a 27°C por 48 horas. Con la finalidad de saber cómo se presentan los síntomas de la bacteria en la planta de patilla se realizó un ensayo con semillas provenientes del suelo original de la plantación en la cual se detectó la enfermedad.
Se utilizó un diseño de bloques al azar con cuatro tratamientos y cuatro replicaciones. Los tratamientos fueron:
Pruebas de patogenicidad Frutos de patilla de la variedad 'Charleston Grey', aparentemente sanos, se inocularon con una suspensión de bacterias de 1 ,5 x 108 cél. bact/ml, mediante dos métodos: 1. Se realizaron punciones en la superficie del fruto con una aguja descartable estéril No.22 y se le colocó la suspensión por aspersión en esa zona. 2. Se seccionó un pedazo de la superficie del fruto abriendo una ventana y se colocó dentro de la suspensión de bacterias; luego se cubrió con el pedazo seccionado anteriormente. Los frutos inoculados se mantuvieron en condiciones de cámara húmeda por 72 horas a temperatura de 28°C 2°C. Identificación del agente causal La identificación del agente causal se basó en la determinación de características culturales de las colonias: borde, elevación, consistencia, color y transmisión de luz; características morfológicas de la célula bacteriana: forma, presencia de flagelo y reacción de Gram, y características fisiológicas. La enfermedad aquí estudiada se presentó en condiciones de alta humedad y temperatura, comprendidas entre 24 y 32°C. Con los métodos utilizados se logró aislar repetidas veces una fitobacteria. El método del macerado de tejido enfermo resultó más efectivo porque indujo mayor rapidez de crecimiento de las colonias y facilitó la purificación. La sintomatología desarrollada en los frutos inoculados en el laboratorio coincidió con la manifestación en el campo en la etapa culminante de la mancha, en la superficie del fruto (Fotos 2 y 3), donde se re aisló nuevamente la bacteria y se constató la presencia de la misma. Los resultados obtenidos en cuanto a características culturales, morfológicas y fisiológicas de la bacteria en estudio, se resumen como sigue:
Características culturales, morfológicas y fisiológicas de Erwinia, agente causal de la marchites bacteriana en cucurbitáceas (patilla - Citrullus vulgaris). Características culturales Color: crema Bordes: enteros. Características morfológicas Prueba de Gram: positiva. Características fisiológicas Colonias amarillas en agar YDC: positivo Crecimiento en medios comunes: positivo Fluorescencia en medio BKing: negativo Crecimiento en medio CVP: positivo Crecimiento anaeróbico: positivo
Crecimiento
a 33 -34°C: positivo El resultado de la prueba de Gram, la ubica como bacteria fitopatógena. La prueba en solución de KOH al 1 %, la cual resultó positiva, elevándose una mucosidad desde el portaobjeto a los 30 segundos, unida a los resultados de las siguientes pruebas: Colonias amarillas en agar YDC: positivo Pigmentos fluorescentes en medio BKing: negativo Prueba de H2S Cysteína: positivo permiten ubicar la bacteria como Erwinia. El resultado de la prueba del crecimiento anaeróbico, el cual resultó positivo, permite ubicar la bacteria dentro del grupo Amylovora. Características culturales. morfológicas y fisiológicas de Erwinia amylovora, agente causal de la marchitez bacteriana en cucurbitáceas (patilla-Citrullus vulgaris) En el ensayo para detectar los primeros síntomas producidos por la bacteria, a los 22 días de la siembra, se observaron puntos o manchas circulares de color oscuro en las hojas inferiores; estas manchas fueron aisladas y sembradas en PDA luego de ser desinfectadas, observándose la presencia de la bacteria de donde fue aislada nuevamente. Lotes de semilla original de esta variedad de patilla han sido analizados, encontrándose que la bacteria viene en la semilla y su diseminación, aparentemente, se realiza por la soca de los años anteriores y de lotes de semilla de fruto sano en apariencia. Es importante señalar que siembras de 150 ha de patilla han reportado un 80% de pérdidas. La enfermedad se observa en el fruto después de los 55 días; es decir, unos diez días antes de que la maduración alcance el estado óptimo (Foto 4). La bacteriosis ha sido detectada en la zona oriental desde septiembre del año 1989, en la localidad de Soledad. Según la bibliografía consultada (8), esta bacteria que se conoce en Estados Unidos y norte de California, es diseminada por insectos del tipo coleóptero, en sus estados larvario y adulto, ya que después que ellos muerden una planta infectada la bacteria se reproduce en el tracto digestivo del animal y la disemina por las heces, encima de las hojas de las plantas. La bacteria no permanece en el tejido muerto de las hojas de la planta enferma, siempre se encuentra en hojas jóvenes. Las pruebas con el insecto no se han podido concluir. Se requiere que estas investigaciones se continúen, ya que esta enfermedad ha repercutido en cuantiosas pérdidas económicas en el oriente del Venezuela. Bibliografia. 1. AGRIOS, G.N. 1978. Plant pathology. 2nd. ed. Academic Press, New York. 703 p. 2. BACTERIOLOGY COMITEE OF AMERICAN PHYTOPATOLOGICAL SOCIETY. 1980. Laboratory guide of identifica tion of plant pathogenic bacteria. NW. Shaad. Ed. Univer- sity of Georgia. Experimental Station. G. A. 69 p. 3. BUCHANAN, R.E. and GIBBON, N.E. 1974. 8ergey's manual of determinative bacteriology. 8th. ed. The Williams and Wilkins, Co., 8altimore, Md., USA. 1472 p. 4.HARRIS, H.A. 1940. Comparative wilt induction by Erwinia tracheiphila and Phytomonas stewartti. Phytopatology 30: 625-638. 5.NUTTAL. V.W. yJ. J.JASIMN. 1958. The inheritance of resistence to bacterial wilt (Erwinia tracheiphila E. F, Smith, Holland) in cucumber. Can. J. Plant Sci. 38: 401-404. 6. PREND. J. y C.A. JOHN. 1961. Method of isolation of Erwinia traheiphila and an improved inoculation technique. Phytopathology 51 : 255-258. 7. STARR, M. 1983. Phytopathogenic bacteria springer - Verlag. New York, USA. 8. WALKER, J.C. 1975. Patología vegetal (Plant Pathology. 3er. ed. 1965). Trad. A. Aguirre Azpeitia. Ediciones Omega. Barcelona, Esp. 818 p. 9. WATTERSON, J.C. y col. 1972. Multiplication and movement of Erwinia tracheiphila in resjstant and susceptible cucurbits. Plant. Dis. Reptr. 56: 949-952. |
