Veterinaria Tropical, 12: 27-37. 1987

BRUCELOSIS EN .CAPRINOS: ESTUDIOS SEROLOGICOS Y 
BACTERIOLÓGICOS EN VENEZUELA

 Verónica R. de lord*, Silvio Nieto*, Espartaco Sandoval**, 
Gerardo Meléndez* y Richard Ruiz*

*FONAIAP. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias
Instituto de Investigaciones Veterinarias
Apdo. 70. Maracay 2101. Venezuela
**FONAIAP. Estación Experimental Falcón. Coro 4101. Venezuela

RESUMEN

Para determinar la incidencia de la brucelosis caprina en Venezuela, un total de 2939 muestras de suero fueron examinadas para la detección de anticuerpos a Brucella usando un antígeno particulad de B. abortus cepa 1119-3, en pruebas de aglutinación (placa, tubo, 2-Mercaptoetanol, rivanol, card test) y fijación de complemento. Asimismo, 1 700 muestras de leche se analizaron mediante la prueba del anillo (ring test). Todas las muestras fueron obtenidas en rebaños sin historia de vacunación, procedentes de los estados Falcón, Lara y Zulia, donde están establecidas las mayores explotaciones caprinas en Venezuela. Del total de caprinos estudiados, resultaron con títulos positivos 365 (12,41 %); 416 (14,15%) presentaron reacciones dudosas y 157 (5,34%) resultaron negativos con bajos títulos de aglutininas. En 1700 muestras de leche examinadas, 518 (30,47%) resultaron positivas a la prueba del anillo. Fueron sometidas a estudios: bacteriológicos 518 muestras de leche y 170 muestras de tejidos (85 de bazos y 85 de ganglios). Brucella abortus biotipo 1 fue aislada en 50 (9,8%) de las muestras de leche y en 15 (17,64%) de las muestras de ganglios, las cuales provenían de animales que resultaron positivos o dudosos, con títulos de 50 UI hasta 200 UI en las pruebas de seroaglutinación y/o 13 UI en fijación de complemento o positivas en la prueba del anillo. No fue aislada B. melitensis. Considerando que en 2939 muestras de suero se detectaron 938 animales reactores a brucelosis, lo que significa un 31,91% de prevalencia en las granjas bajo estudio, se sugiere el establecimiento de medidas de profilaxis en las explotaciones caprinas del país.

INTRODUCCIÓN

La brucelosis en caprinos, generalmente producida por Brucella melitensis, es una enfermedad que incide negativamente en la producción y productividad de las explotaciones caprinas. Sin embargo, en muchos casos B. abortus puede estar involucrada.

El cuadro clínico suele ser similar en caprinos y ovinos, pero estos últimos son ligeramente más resistentes. Los abortos pueden ocurrir en más de1 15% de los animales del rebaño, además es frecuente observar artritis, pérdida de peso, laminitis y bronquitis asociada con tos seca. Las crías pueden contraer la infección en el útero o después del nacimiento, pero normalmente se recuperan de manera espontánea antes de llegar a la madurez sexual, sin embargo, en ocasiones la infección puede persistir por largos períodos (12). 

La brucelosis ovina y caprina por B. melitensis es la causa más frecuente de infección en el hombre, no así la brucelosis bovina, la cual sigue teniendo una amplia difusión, particularmente en los países en desarrollo, sin embargo, muy pocas de las campañas para combatirla han tenido éxito (2). 

Las pruebas serológicas empleadas con mayor frecuencia para el diagnóstico de la brucelosis caprina son las mismas que se emplean para el diagnóstico en bovinos, utilizándose inclusive los mismos antígenos preparados generalmente con cepas de B. abortus y, en ocasiones, de B. melitensis (2). 

Debido a los bajos niveles de anticuerpos aglutinantes, las pruebas de aglutinación en placa y tubo poseen un valor limitado, por lo cual se hace necesario aplicar criterios estrictos de interpretación. Para algunos autores es común considerar positivas reacciones de 1:25, sin embargo, se recomienda registrar como positivos los reactores a la dilución 1:50 (30). 

Las pruebas serológicas son de una apreciable utilidad para la detección y eliminación de animales infectados; estudios realizados en Egipto (1) señalan que de 468 sueros de cabras analizados, un 4,70% resultaron positivos en pruebas de seroaglutinación de tubo, mientras que en 354 muestras de leche el 3,96% resultó positivo. Otros autores han encontrado que la incidencia de brucelosis en cabras, utilizando la misma prueba de seroaglutinación, puede variar desde bajos porcentajes 0,45% - 2,10% hasta altos porcentajes de 5,60 - 5,59% (3, 19, 24, 26, 27). Por otra parte Kumar (19) realizó estudios serológicos detectando 0,33% de reactores positivos, y, a pesar de ello, logró aislar B. melitensis en uno de animales. 

Fadale (6) comparó tres técnicas serológicas para el estudio de la brucelosis caprina en 2550 sueros de cabras, encontrando una correlación entre las pruebas de tubo y card test cuando ambas eran negativas, concluyendo que la prueba de tubo ofrece un mejor diagnóstico para la brucelosis caprina. 

Posteriormente, Fadale y Hussein (7) al evaluar cinco técnicas serológicas, observaron igualmente que existía una correlación entre la prueba de tubo y card test, resultando las pruebas de Coombs y rívanol más sensibles y específicas.

Estudios realizados por Papadopoulos y Koptopoulos (25), evaluando la prueba de card test junto con la de fijación de complemento, detectaron con el card test una tasa de 11,1% de falsos positivos y 1,4% en relación con la de fijación de complemento. Por su parte Waghela et al. (29) señalan el card test como la prueba más sensible y la prueba de inmunodifusión como la más específica. 

Los estudios serológicos realizados por Falade (9) en Nigeria mostraron una correlación entre la prueba de tubo y 2-Mercaptoetanol, la prueba de rivanol arrojó resultados muy similares; con las pruebas de card test y Coombs se detectaron 2 y 61 sueros positivos, respectivamente, y en 138 muestras de leche probadas, 46 resultaron positivas. 

En otro estudio realizado por Falade (10), en cabras no vacunadas y vacunadas con Rev-1 , se observó una buena correlación entre card test, tubo, Rivanol e inactivación por calor, cuando eran negativas, mientras que el card test resultó más sensible en cabras vacunadas; la utilidad de la rivanol no fue bien definida. 

Es relevante la información de la investigación de Gaitan et al. (13), sobre 100 muestras de suero de cabras, de las cuales solamente 27 resultaron positivas a las pruebas de seroaglutinación, mientras que 70 resultaron positivas a las prueba de Coombs (13). 

En cuanto a la prueba de seroaglutinación de placa, el estudio de 518 cabras realizado por Touil (28), en tres rebaños, señalan que 21 cabras (4%) resultaron positivas mediante la prueba de seroaglutinación rápida, así como también ocho humanos que estaban relacionados con los rebaños infectados. 

Los objetivos de esta investigación fueron conocer la incidencia de la brucelosis caprina en los estados del país con mayor número de explotación de este tipo de rebaños utilizando estudios serológicos y bacteriológicos.

MATERIALES Y METODOS

Para alcanzar los objetivos fijados para este estudio, se emplearon los siguientes procedimientos: 

A. Serología

Un total de 2939 muestras de sueros y 1 700 muestras de leche de caprinos fueron tomadas en granjas localizadas en los estados Falcón, Lara y Zulia, así como de las Estaciones Experimentales del FONAIAP en el estado Lara y los centros de recría del Ministerio de Agricultura y Cría. 

Las muestras de suero fueron estratificadas por categorías: 

1) cabras en producción
2) cabras secas
3) cabritonas (4-8 meses de edad)
4) cabritones (4-8 meses de edad)
5) reproductores
6) retajos

Las muestras de suero fueron sometidas a seis pruebas serológicas: aglutinación rápida (placa) y lenta (tubo); 2-Mercaptoetanol; rivanol; card test y fijación de complemento con un antígeno particulado de B. abortus (elaborado en el Instituto de Investigaciones Veterinarias-FONAIAP). Los procedimientos empleados en cada prueba corresponden a los descritos por Alton et al. (2). 

B. Bacteriología

Las muestras de leche (1 700) fueron tomadas de las cabras en producción conjuntamente con las 85 muestras de bazo y 85 de ganglios, de cabras enviadas al matadero por haber resultado dudosas o positivas en las pruebas serológicas, fueron sometidas a estudios bacteriológicos para intentos de aislamientos de Brucella.

Las muestras de leché fueron centrifugadas y se sembraron muestras de nata y sedimento de cada una. Los medios de cultivo utilizados fueron albimi, triptosa y Kuzdas Morse, distribuidos en placas de Petri. 

Para la identificación de los aislamientos se observó la morfología según el método de Henry y muestras de colonias fueron teñidas por el Método de Gram y Koster (2). Posteriormente todas las colonias representativas del género Brucella fueron seleccionadas y sembradas en medios con y sin suero e incubados a 37°C con y sin CO₂. 

Las colonias sospechosas a Brucella fueron sometidas a Pruebas de acriflavina e inundación de cristal violeta, con el fin de determinar si las colonias aisladas eran lisas o rugosas (2). 

Todas las colonias seleccionadas como representativas del género Brucella fueron sometidas a las siguientes pruebas bioquímicas: ureasa, catalasa, oxidasa, producción de ácido sulfídrico (21) y prueba de sensibilidad en diferentes colorantes: fucsina básica y tionina (dilución 1 :25000, 1 :50000 y 1 :100000), violeta de metilo (1 :100000) (16) y safranina (1 :5000) (2). También fueron sembradas en medios de cultivo conteniendo l-Eritritol (1 mg/ml) y penicilina 5 UI/ml (2). Todas las cepas fueron analizadas utilizando la prueba de aglutinación con sueros monoespecíficos anti-A y anti-M para conocer los determinantes antigénicos, así como la prueba de sensibilidad al Fago Tbilisi, empleando dos concentraciones diferentes: dosis habitual de pruebas (DHP) y una suspensión de 10⁴ x DHP con el fin de determinar la norma lítica de las cepas aisladas (2).

RESULTADOS

El diagnóstico de brucelosis se basa principalmente en el uso de las técnicas serológicas, el cual si está acompañado de estudios bacteriológicos asegura un mejor diagnóstico, especialmente cuando se trata de caprinos. 

En este estudio, los niveles de anticuerpos detectados oscilaron entre 25 UI y 200 UI en las diferentes pruebas serológicas utilizadas. 

B. abortus biotipo 1 fue aislada de cabras que resultaron con títulos de anticuerpos de 50 UI y 200 UI en las pruebas de seroaglutinación y/o 13 UI en fijación de complemento, así como positivos al card test ya la prueba del anillo. 

Al analizar !os resultados serológicos obtenidos, se puede observar que el mayor porcentaje (58,09%) de reactores fueron detectados en los estados Zulia (Cuadro 1) y Falcón (53,29%) (Cuadro 2), siendo mucho más bajo en el estado Lara (25,01%) (Cuadro 3). 

En las muestras de leche se obtuvo un porcentaje de positividad del 30,47%, lo cual está correlacionado con el alto porcentaje de reactores en serología. En 9,6% de las muestras estudiadas se logró aislar Brucella, mientras que a partir de ganglios se aisló un 17,64%; en ambos casos se aisló Brucella abortus biotipo 1. Los porcentajes de positividad obtenidos indican que existe un problema serio de brucelosis en los rebaños estudiados.

DISCUSIÓN

En este estudio se pudo observar que el mayor porcentaje de animales reactores fueron detectados por el uso de la prueba de tubo (lenta), seguida de la prueba de rivanol y 2-Mercaptoetanol, las cuales resultaron ser más sensibles y específicas en relación con el de card test y fijación de complemento, observándose en algunos casos una correlacción entre detección de anticuerpos y aislamiento de Brucella. las pruebas de fijación de complemento y card test, aunque muy específicas resultaron ser menos sensibles. 

Se pudo observar una correlación entre las pruebas de tubo (lenta) y la prueba de anillo. 

En todos los estados la incidencia de brucelosis fue mayor en las cabras en producción: 61 ,90% en el estado Falcón, 27 ,94%, en el estado lara y 77 ,33% estado Zulia; la incidencia más baja se presentó en los animales más jóvenes. 

Estos hallazgos concuerdan con los obtenidos por López et al. (20) y Karvounaris y Papakuriako (18), quienes encontraron una alta incidencia, 30 y 50%, respectivamente, de brucelosis caprina en sus investigaciones. 

Sin embargo, otros autores señalan en sus estudios, porcentajes muy bajos como es el caso de Richard (26), Hircher et al. (15), Panda y Pat (24) y Tadjebakhch y Gatel (27), quienes detectaron una baja incidencia: 5,90; 5,59; 0,45; 2,10%, respectivamente. 

Los resultados obtenidos en la prueba del anillo fueron más altos que los alcanzados por otros autores (4, 22). 

B. melitensis es una de las especies más patógena tanto para los animales como para el hombre y los caprinos son el huésped preferido, pero ellos pueden igualmente ser infectados con otras especies de Brucella, con un menor grado de patogenicidad. 

En este estudio se aisló B. abortus, especie menos patógena para caprinos, y aunque se detectaron pocos casos de abortos y otros síntomas asociados con brucelosis, la situación puede ser más grave si se hubiese tratado de B. melitensis. 

Es importante señalar que algunos de los rebaños caprinos estudiados convivían con bovinos, lo que permite pensar que posiblemente por ello se infectaron con B. abortus. 

Considerando los porcentajes de positividad obtenidos, se prescribieron las siguientes acciones: 

1. Eliminación de todos los animales que resultaron reactores (positivos y dudosos) 
2. Rechequeo a los 30-35 días con respecto a la primera muestra tomada; para todos aquellos animales que resultaron con bajos niveles de anticuerpos (1/25 UI)
 3. Realizar chequeos serológicos dos veces al año al rebaño existente y chequeos de inmediato cuando se introduzcan nuevos animales a las granjas, estaciones experimentales o centros de recría
4. Muestreos de leche para la prueba del anillo
5. Establecer rigurosos métodos de profilaxis en el país
6. Una vez al año, tomar muestras de sangre al personal que labora en las explotaciones.

SUMMARY

To determine the incidence of caprine brucellosis in Venezuela, a total of 2.939 sera were examined for the detection of Brucella antibodies using a particulate antigen of B. abortus strain 1119-3, in agglutination tests (plate, tube, 2-Mercaptoethanol, rivanol and card test) and complement fixation. Likewise 1.700 samples of milk were analysed by the ring test. All samples were obtained from herds without a history of vaccination, coming from three States with the greatest established explotation of goats in Venezuela (Falcon, Lara and Zulia). Of the total sample studied, 365 (12.41%) were positive, 416 (14.15%) were suspect reactors and 157 (5.34%) were negative with low titers of agglutinins. Of 1.700 milk samples examined, 518 (30.47%) were positive for the ring test. Bacteriological examinations were made of 518 milk samples and 170 tissue (85 spleens and 85 lymph nodes). Brucella abortus  biotype 1 was isolated from 50 (9.8%) of the milk samples and 15 (17.64%) of the lymph nodes (0 from 85 spleens), all of which came from animals which were serologically positive or suspect with titers of 50 IU to 200 IU in the agglutination test and/or 13 UI in complement fixation. To date B. melitensis has not been isolated in Venezuela. Considering that of 2.939 sera, 938 reactors to brucellosis were detected, signifying a prevalence of 31.91% in the herds studied, establishment of prophilaxis measures of the goat herds of the country are suggested.

BIBLIOGRAFIA

1. ABD-EL-GHANI; OSMAN, M.; NADA, S. M. 1983. Evaluation of serodiagnostic methods for brucellosis among sheep and goats in Egypt.lnt. J. Zoon. (Egypt) 10(2): 132-137.

2. ALTON, G. G.; JONES, L. M.; PIETZ, D. E. 1975. Laboratory techniques in brucellosis. 2 ed. Geneva, Suiza. Monograph Series 55. p. 77 -82.

3. ANDREANI, E.; PROSPIN, S.; SALIM, A. H.; ARUSH, A. M. 1983. Serological and bacteriological investigation of brucellosis in domestic ruminants of the Somali Democratic Republic. Revue d' Elevege et de Médecine Vétérinaire des Pays Tropicaux. (Italy) 35(4): 329-333.

4. AWAD, F. I.; HAFEEZ, M. A.; SALEM, A. A; SHAWKA T, M. E. 1975. Studies on brucellosis in sheep and goats in Egypt. Egypt. J. Vet. Sci. (Egypt) 12: 95-105.

5. BALE, J.; NURU, S.; ADDO, P. B. 1982. Serological study of sheep and goats brucellosis in Northern Nigeria. Bulletin of Animal Health and Prodljction in Africa (Nigeria) 30(1): 73-79.

6. FALADE, S. 1978. A comparison of three serological test in the diagnosis of caprine brucellosis. Research in Veterinary Sciece (Nigeria) 24(3): 376-377.

7. FALADE, S.; HUSSEIN, A. H. 1979. Brucel1a seroactivity in Somali goats.tropical. Animal Health and Production (Nigeria) 11 (4): 211-212.

8. FALADE, S. 1981. Brucellae isolated from goats. Zentralblatt. für Veterinarmedizin. B. 28(3): 205-209.

9. FALADE, S. 1981. Caprine brucellosis serological studies in Nigeria. Bulletin of Animal Health and Production in Africa (Nigeria) 29(2) : 157 -161.

10. FALADE, S. 1983. Some observations on the use of the Rose Bengal plate, tube agglutination, heat inactivation and rivanol test in caprine brucellosis. Tropical Veterinarian (Nigeria) 1 (1): 49-53.

11. FEINHAKEN, D.; DAFNI, O. 1980. Identification of Brucella isolates in Israel, 1970-1979. Repuah Veterinarith (Israel) 37(4):117 -123.

12. FLORES, R. 1978. Memorias del Foro Nacional sobre Brucelosis. Instituto Nacional de Investigaciones Pecuarias, Palo Alto, México. Escuela Nacional de Estudios Profesionales U.N.A.M.-México, 109 pp.

13. GAITAN, A. U.; BENITO, A. A.; SERRANO de BURGAS, E.; GIJON, F. C.; CONTRERAS, A. G. 1983. Incomplete (blocking) antibodies in the serological diagnosis of caprine brucellosis. Archivos de Zootecnia (Spain) 32(123): 193-201.

14. GIANTZIS, D. G.; KASTANIDOU, H. 1984. Identification and typing of some Brucella strains isolated from sheep, goats, and cattle in northern Greece. Hellenic Veterinary Medicine (Greece) 27(4): 165-175.

15. HIRCHERT, R.; LANGE, W.; LEONHARDT, H. G. 1967. Ocurrence of B. melitensis in animals in Syria. Berl. Munch. Tierarztl. Wschr. (Syria). 80: 45-48.

16. HUDDLESON, I. F. 1931. Differentiation of the species in the genus Brucella. Am. J. Public Health (EE.UU.) 21: 491-498.

17. KAPUR, M. P.; KULSHRESHTHA, R.C.; KALRA, D. S. 1979. A note on an epidemic of abortions associated with brucellosis in goats and comparative serology of disease. Indian J. Anim. Sci. 49(9): 769-770

18. KARVOUNARIS, P.; PAPAKURIAKO, E. 1971. Research into the epidemiology of brucellosis in Greece. In: Symposium on Bacteriology (4, 1975, Greece) Proccedings.97-117.

19. KUMAR, R.; QUADER, S. A.; ARUNACHALAM, T. N. 1976. Brucellosis in goats. Indian Vet. J. (India) 53(7): 493-494.

20. LOPEZ, E. T.; GOJON, D. L.; GARZA, F. I. 1970. Prevalence of caprine bruceIlosis in Mexico. Bol. Ofc. Sanit. Panam (EE.UU.) 49: 287 -290.

21. MacFADDIN, J. F. 1980. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínica. Buenos Aries, Arg. Médica Panam. 301 p.

22. MATHUR, T. N. 1968. Brucellosis among goats and sheep in Haryana.lndian Vet. J. (India) 45: 91-102.

23. MOTIE, A.; MYERS, D. M. 1985. Serological survey for Brucellosis in sheep and goats in Guyana. Trop. Anim. Health Production (Guyana) 17: 247.

24. PANDA, S. N.; PAT, K. B. 1967. Significance of blocking antibodies in bruceIlosis in goats. Indian. J. Anim. Hlth. (India) 6: 267 -271.

25. PAPADOPOULOS, O.; KOPTOPOULOS, G. 1978. Application of the Rose Bengal plate test in the diagnosis of brucellosis. Hellenic. Microbiologic Act. Greece. Thessaloniki; Greece.

26. RICHARD, C. 1966. Animal Brucellosis. Alfort, Paris, S1. Ecole Nat. Vet. France.

27. TADJEBAKHCHE, H.; GATEL. A. 1972. Incidence sérologique des anticorps ant-brucelliques chez les animaux domestiques de I'homme en Iran. Rev. Elev. Méd. Vét. Pays trop. (Iran) 25(4): 521-525.

28. TOUIL, S. 1984. Serological study of caprine and human brucellosis in the Mateur region, Tunisia. Maghreb Vétérinaire (Tunisia) 1 (4):48.

29. WAGHELA, S.; WANDERA, J. G.; WAGNER, G. G. 1980. Comparison of four serological tests in the diagnosis of caprine brucellosis. Research in Veterinary Science (Keyna) 28(2) : 168-171.

30. WORLD HEAL TH ORGANIZA TION. 1986. Sixth Report of the Joint FAO/WHO Expert Committee on Brucellosis. Geneva, Suiza. WHO Tech. Report Series 740.

31. WORTHINGTON, R. W.; MÜLDERS, M. S. G. 1970. Antigenic relationship of B. ovís to B. abortus and B. melitensis using the complement fixation test. Onderstepoort J. Vet. Res. (South Africa) 36: 191-197.