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Veterinaria Tropical 14: 15-27. 1989 APLICACIÓN
DE LA PRUEBA MICROANTIGLOBULINA EN LA DETECCIÓN DE AGLUTININAS DE C. R. de Noguera*, D. Infante*, A. León A.*, C. Quiroz*, A. Herrera* y P. Valdillo *FONAIAP |
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RESUMEN Con la finalidad de medir la respuesta serológica a Salmonella saint-paul (paratifoide del serogrupo B), se inocularon aves reproductoras de 48 semanas de edad, durante 12 días consecutivos, con una dosis de 105 células para un total de 12 x 105 células. al final del experimento. La producción de aglutininas fue determinada por pruebas de Microaglutinación (MA) y Microantiglobulina (MAG), tomando muestras de las aves los días 6, 12, 15, 21' 28 y ~6 después del comienzo de la prueba. En los días 6 y 12 no hubo reactoras a MA, mientras que con MAG, el día 6, algunas aves resultaron positivas con títulos de 1/20. La respuesta serológica máxima se constató el día 15 usando MAG, con el 91 ,6% de las aves positivas y con títulos desde 1/20 hasta 1/320. Al mismo tiempo (15 días), solo 3 reproductoras fueron positivas con MAG (títulos desde 1/20 hasta 1/40) y sólo u n ave (8,3%) fue positiva con MA a un título de 1/20. Se concluye, que MAG fue más efectiva en la detección de anticuerpos circulando en reproductoras pesadas contra un cepa de Salmonella saint-paul. INTRODUCCIÓN Existen numerosos métodos serológicos, para la detección de aglutininas generadas en las infecciones causadas por salmonelas, siendo algunos más sensibles que otros. La respuesta serológica de las aves infectadas con integrantes del género Salmonella es variable; los niveles de aglutininas son mayores en el suero de las aves infectadas con las salmonelas huésped específicas (S. pullorum y S. gallinarum), mientras que en las infecciones causadas por salmonelas paratifoides, las aglutininas estimuladas, después de la invasión intestinal por la - bacteria, son con frecuencia de naturaleza incompleta, no detectables por los métodos serológicos convencionales (5,6), requiriéndose de métodos más sensibles para su detección. Los anticuerpos incompletos pueden unirse al antígeno homólogo pero sin producirse la aglutinación. Cuando se utiliza una globulina anti-especie apropiada, ésta se une al anticuerpo y ocurre la aglutinación, la cual es fácil- mente visualizada (5). La técnica de microaglutinación se utiliza en la detección de infecciones por S. pullorum y S. gallinarum (8), igualmente se aplica la técnica de Coombs para detectar la presencia de anticuerpos débiles o incompletos en aves infectadas con salmonelas móviles mediante la prueba de Microantiglobulina (9); ambas pruebas son las recomendadas para la detección de salmonelas grupos S y C, en lotes de aves que están o han sido infectadas en forma natural o experimental (11). El objetivo de este trabajo fue la detección de aglutininas producidas en aves reproductoras, luego de la infección experimental con S. saint-paul usando las pruebas de Microaglutinación (MA) y Microantiglobulina (MAG). MATERIALES Y MÉTODOS Cepa de exposición. La cepa de S. saint-paul, utilizada en el experimento, procedía del Laboratorio .de Patología Aviar del Instituto de Investigaciones Veterinarias (IIV), la cual había sido aislada de pavos. Aves experimentales. En el experimento se usaron 18 aves reproductoras de 48 semanas de edad, raza Cobb, procedentes de una granja libre de salmonelas. Antes de la exposición, todas las aves fueron sangradas para detectar la presencia de anticuerpos contra salmonelas del tipo B. Las aves que se expusieron a S. saint-paul fueron identificadas con números del1 al12 (Grupo A) y aquellas que sirvieron de control como C1 al C6 (Grupo B). Las aves se mantuvieron en jaulas individuales durante todo el experimento y consumieron alimento yagua ad libitum. Las reproductoras del grupo A fueron inoculadas por vía oral, durante doce días consecutivos, con 0,33 ml de un cultivo de S. saint-paul, en agua peptonada conteniendo aproximadamente 105 células viables por dosis; cada ave recibió un total de 12 x 105 células durante el período de exposición. La concentración de la suspensión de bacterias fue determinada de acuerdo con la técnica del Nephelómetro de McFarland (3, 7). Las aves controles se inocularon por la misma vía, con la misma dosis pero de peptona, al1 % estéril, durante el mismo período. La detección de aglutininas se realizó usando MA y MAG (9, 11 ). Las muestras de sangre se tomaron de la vena braquial de las aves a los 6, 12, 15, r 21, 28 y 36 días de haberse iniciado el período de exposición. Antígeno, suero híperinmune y microantiglobulina. El antígeno usado en las pruebas MA y MAG fue un antígeno elaborado en el I IV, usando una cepa standard de S. typhimurium (Cepa P-10), siguiendo la técnica descrita por Williams y Whittemore (10). Como suero control positivo se usó un suero hiperinmune ( 1) para salmonelas del grupo B, con el cual fueron inoculados pollos Leghorn libres de gérmenes patógenos. En la prueba MAG se utilizó la antiglobulina Rabbit Anti Chicken Globulin serum (The Sylvana, Millburn, New Jersey. USA), la cual se diluyó 1: 100 antes de su uso. Alimento. Se obtuvo de una planta comercial y se suministró. al igual que el agua, ad-Iibitum. Por ser considerado el alimento una de las fuentes de transmisión de salmonelas, fue necesario hacer cultivos del mismo previo a su consumo, para tener la seguridad de que estaba libre del patógeno, En el cultivo se aplicó la técnica descrita por Williams et al. ( 14), modificada. ya que no se usó el Tergitol No.7. RESULTADOS Antes de la exposición todas las aves resultaron negativas a la detección de anticuerpos contra salmonelas del grupo B" y por lo tanto consideradas li bres del referido grupo serológico. En los Cuadros 1 y 2 se observa que todas las aves fueron negativas a la detección de algutininas cuando se usó la prueba MA a los 6 y 12 días. mientras que con la prueba MAG, dos aves resultaron positivas con títulos de 1/20 a los 6 días, y en e150% de ellas se detectaron aglutininas con títulos de 1/20 a 1/80 a los 12 días, manteniéndose los títulos de las aves números 2 y 12 en 1/ 20. Como se aprecia en el Cuadro 3, a los 15 días de iniciado el experimento, tres aves fueron positivas a la detección de aglutininas con título de 1/20 con la prueba MA, mientras que con la prueba MAG, 11 aves (91,6%) resultaron positivas a la detección de aglutininas con títulos de 1/20 a 1/320, detectándose en este muestreo los títulos más elevados y el mayor número de aves positivas en todo el experimento. A los 21 días de iniciado el ensayo (Cuadro 4), mediante la prueba MA, comienza a observarse un descenso en el número de aves positivas, manteniendo títulos de 1/20; con la prueba MAG se detectó el mismo número de aves positivas (91,6%) que a los 15 días, pero con un descenso en los títulos los cuales fueron de 1/20 en 7 aves, 1/40 en 2 aves y 1/80 en 2 aves. A los 28 días (Cuadro 5), a través de la MA, tan solo un ave con título de 1/ 40fue detectada y con MAG, 9 aves (75%) fueron positivas con títulos de 1/40 a 1/80, notándose un incremento de título en algunas aves y disminución en
otras. Al final del experimento (Cuadro 6), sólo 1 ave resultó positiva con título de 1/20 con la MA, mientras que con MAG se detectaron 7 aves positivas con título máximo de 1/40. Es de hacer notar que el ave No.5, que resultó negativa a los 28 días mediante MAG, presentó un título de 1/40 a los 36 días con la misma prueba. En la Figura 1 se observa que a los 6 días de iniciado el experimento comenzaron a detectarse aves serológicamente positivas con la prueba MAG, mientras que con la MA ocurrió a los 15 días. En la misma Figura se aprecia que a los 15 días existe el mayor número de aves positivas con la prueba MAG, así como los títulos más altos de anticuerpos, manteniéndose el mismo número de aves positivas hasta los 6 días siguientes, fecha en la cual comienza a disminuir. DISCUSIÓN La detección de aves infectadas con salmonelas paratifoides es limitada cuando se usan las pruebas tradicionales (2, 13), de ahí la necesidad de utilizar pruebas más sensibles en la detección de lotes que están o han sufrido infecciones especialmente con salmonelas de los grupos B, C y D (11 ). El hecho de que las aves experimentales fueron negativas a la presencia de anticuerpos antes de la inoculación con la salmonela en estudio, como se demostró con las pruebas MA y MAG, y la posterior aparición de las aglutininas post-inoculación de los gérmenes, indican que las aves susceptibles respondieron a la exposición con la S. saint-paul. Los resultados obtenidos en este experimento con la mayor detección de aves positivas, y los títulos más elevados cuando se usó la prueba MAG, concuerdan con los resultados obtenidos por otros autores (4, 12, 13) cuando usaron tanto las pruebas convencionales como MAG. Williams y Whiettemore (9) encontraron que en aves expuestas con S. typhimurium, los títulos con la prueba MAG fueron 5 a 10 veces más altos que en la prueba MA y 5 a 16 veces más elevados que con la prueba de aglutinación en tubo. Por su parte, WiIliams y Whittemore (12, 13) observaron que la prueba MAG fue superior a MA en la detección de aves infectadas con S. typhimurium y S. thompson, pero no encontraron mayor diferencia en las aves infectadas con S. pullorum cuando se usaron las mismas pruebas. Cuando Thain (4) expuso un lote de aves a S. montevideo y S. hadar encontró aves que fueron positivas con MAG pero sin obtener el aislamiento de las salmonelas. Las aves portadoras de salmonelas constituyen una fuente de infección potencial para lotes de aves susceptibles, siendo por lo tanto recomendable el uso de pruebas altamente sensibles en la detección de aves infectadas, especialmente con salmonelas paratifoides, para poder ser eliminadas lo antes posible de las explotaciones.
SUMMARY In order to measure the serogic responce to Salmonella Saint-paul (serogroup B, paratyphoid), 48 week old heavy breeders were inoculated during 12 consecutive days, with a dose of 105 cells, to a total of 12 x 105 cells at the end of the experiment. The agglutinins production was determinated by Mi- croagglutination (MA) and Microantiglobulin (MAG) tests, sampling the birds on days 6, 12, 15,21 28, and 36 after the beginning of the experiment. On the day 6, some birds were positive with titer of 1/20. The maximal serological res- ponse was detected on day 15 using MAG test with 91,6% of the breeders po- sitive and titers ranging from 1/20 to 1/320. At the same time (15 days), only 3 birds were positive having titers of 1/20 with MA test. At the end of the trial, 58,3% of the breeders were positive with MAG test (titers from 1/20 to 1/40) and only 1 bird (8,3%), was positive with MA test at a titer of 1/20.lt may be conclued, with these results, that MAG test was more effective in the detection of circulating antibodies in heavy breeders against one strain of Salmonel1a saint-paul. BIBLIOGRAFÍA 1. EDWARDS, P. R. and W. H. EWING. The genus Salmonella. Identifica- tion of Enterobacteraceae. 3ra. ed. Ch. 8. 1972. pp. 146-207. 2. OLESIUK, O. M., V. L. CARLSON, G. H. SNOEYENBOS and C. F. SMYSER. Experimental Salmonella typhimurium infection in two chicken flocks. Avian Dis. 13: 500-508. 1969. 3. PAIX, G. and M. T. SUGGS. Reagents, stains and miscellaneous test procedures. In: Manual of Clinical Microbiology. 2a. ed. Ed. Edwin H. Lennette, Earle H. Spaulding and Joseph P. Truant. 1974. p. 930-950. 4. THAIN, J. A. An evaluation of the microantiglobulin test in monitoring experimental Salmonella group C infections in chickens. Research in Veterinary Science. 28: 212-216. 1980. 5. THAIN, J. A. and G. A. CULLEN. Detection of Salmonella typhimurium infection of chickens. Vet. Rec. 102:143-145. 1978. 6. WILLIAMS, J. E. Avian Salmonellosis: Detection and characterization of serologic response to major serogroup infections. Am J. Vet. Res. 36: 591-592. 1975. 7. WILLIAMS, J. E., MAcFarland Nephelometer. Isolation and identification of avian pathogens. 2a. ed. The American Association of Avian Pathologistis. 1980. pp. 141. 8. WILLIAMS, J. E. and A. D. WHITEMORE. Serological diagnosis of pullorum disease with the microaglutination system. Appl. Microbiol. 21 : 394-399. 1971. 9. WILLIAMS, J. E. and A. D. WHITEMORE. Microantiglobulin test for detecting Salmonella typhimurium agglutinins. Appl. Microbiol. 23: 931-937. 1972. 10. WILLIAMS, J. E. and a. D. WHITEMORE. Avian salmonella-stained microtest antigens produced on solid media. Appl. Microbiol. 26: 1-3. 1973. 11. WILLIAMS, J. E. and A. D. WHITEMORE. Microtesting for avian salmonellosis. Proceedings 77 th Annual Meeting U. S. Animal Health Association. 607 -613. 1973. 12. WILLIAMS, J. E. and A. D. WHITEMORE. Influence of age on the serological response of chickens to Salmonella typhimurium infection. Avian Dis.1975. 19:745-760. 13. WILLIAMS, J. E. and A. D. WHITEMORE. Serological response of chickens to Salmonella thompson and Salmonella pullorum infections. Journal of Clinical Microbiology. 9: 108-114. 1979. 14. WILLIAMS, J. E., E. T. MALLINSON and G. H. SNOEYENBOS. Salmonelosis and Arizonosis. Isolation and identification of avian pathogens. 2a. ed. The American Association of Avian Pathologists. 1980. pp. 1-8. |
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