Veterinaria Tropical 17: 3-13. 1992 ESTUDIO DE PATOGENICIDAD DE UNA CEPA DE Salmonella saint-paul Carmen R. de Noguera*, Dilia Infante*, Antonio León A.*, Nelva R. de Rolo*,
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RESUMEN Se probó la patogenicidad de una cepa de Salmonella saint-paul en reproductoras de 48 semanas de edad, inoculadas por vía oral durante doce días consecutivos, con una dosis de 1 x 105 gérmenes aproximadamente. Las aves expuestas solo presentaron diarrea, con una curva de producción sin alteraciones significativas y no se registró mortalidad. A la necropsia se observaron dos aves con huevos retenidos en la cavidad abdominal, en una de ellas los huevos presentaban superposición de cáscara. El 83,3% de las aves presentaron, en la cavidad abdominal, óvulos hemorrágicos, flácidos y rotos y el 41,6% tenían hemorragias en el oviducto. En el 100% de ellas se observaron las tonsilas cecales hemorrágicas. La S. saint-paul se recuperó de las tonsilas cecales y ciego de una de las aves, y solo el ciego de otra. Los cultivos de hígados, óvulos y oviductos fueron negativos en todos los casos. INTRODUCCIÓN Las Salmonellas pertenecen al grupo de patógenos entéricos que invaden la barrera epitelial y, bajo ciertas condiciones, pueden causar infecciones sistémicas (1, 2, 18). Williams (21) considera que las propiedades patogénicas de las Salmonellas son debidas a endotoxinas asociadas con la porción somática de la bacteria. Algunos serotipos de Salmonellas (19) se lisan rápidamente después de su inoculación, con la liberación de gran cantidad de endotoxinas causando mortalidad, mientras que otros serotipos necesitan estar en grandes concentraciones y requieren de mayor tiempo para que se libere la endotoxina y cause mortalidad. La susceptibilidad de los individuos a las infecciones causadas por Salmonellas, puede ser incrementada tanto por factores predisponentes como por la respuesta inmunológica individual; pudiendo también, depender el desarrollo de la infección, de la capacidad del germen para invadir y multiplicarse en los tejidos del hospedero, del tamaño de los dosis y la virulencia del microrganismo (4). Infecciones agudas pueden ocurrir bajo ciertas condiciones de stres, tales como una alimentación inadecuada, la presencia dc otras enfermedades, medio ambiente y condiciones sanitarias deficientes (5). Las aves adultas afectadas con Salmonellas paratifoides en muchas ocasiones no presentan síntomas ni lesiones de la enfermedad, pero pueden ser portadoras del microorganismo, constituyendo una fuente de contaminación de los huevos y canales (13, 15, 18, 20, 26). Otras investigaciones (3, 11) señalan manifestaciones clínicas acompañadas de ligera alteración de la cuerva de postura y lesiones en los órganos internos. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la patogenicidad causada por una cepa de Salmonella saint-paul en gallinas reproductoras. MATERIALES Y MÉTODOS Cepa de exposición: se utilizó una cepa de Salmonella saint-paul aislada de pavos en un brote de campo. Aves experimentales: se utilizaron 18 gallinas reproductoras, raza cobbs, de 48 semanas de edad, procedentes de una granja libre de Salmonellas, las cuales fueron identificadas y colocadas en jaulas individuales, se separaron en dos grupos, el A (12 aves) correspondientes a las aves expuestas con la cepa en estudio y grupo B (6 aves), que sirvieron como controles. Antes del período de exposición, las aves de ambos grupos fueron analizadas por detección de anticuerpos y excreción de Salmonellas, durante diez días consecutivos para determinar si estaban libres de Salmonellas. Para la detección de anticuerpos se tomaron muestras de sangre al primero, quinto y décimo día pre-desafío y se utilizaron las pruebas de Microaglutinación y Microantiglobulinas, descritas por Williams y Whittemore (22,23), utilizando antígenos de los grupos B y D. Para el estudio de una posible excreción fecal de Salmonellas se tomaron hisopados cloacales interdiarios, siguiendo las técnicas descritas por Ellis et al., y Williams et al., (7,25). Inoculación de las aves experimentales: cada una de las aves del grupo A, fueron inoculadas diariamente por vía oral, durante 12 días consecutivos, con 0,33 mI de un cultivo de 18 horas, de Salmonella saint-paul, que contenía aproximadamente 1 x 105 gérmenes, esta concentración fue determinada por la técnica del Nefelómetro de McFarland (14). El grupo B (controles) se inoculó diariamente con 0,33 mI vía oral con agua peptonada al l %. Para detectar la excreción del germen a través de las heces, se tomaron hisopados cloacales interdiarios durante todo el período de observación. Evaluación de la patogenicidad: se determinó por la presencia de signos clínicos, mortalidad y lesiones macroscópicas en órganos internos. El período de observación fue de 36 días, tiempo que duró el ensayo. Una vez finalizado este período, se sacrificaron las aves, se necropsiaron, se hizo una revisión minuciosa de los órganos internos y se tomaron muestras de hígado, óvulos, oviducto, ciegos y tonsilas cecales para análisis bacteriológico. Todas las muestras fueron procesadas siguiendo la metodología descrita por Williams et al (25) e Infante et al (10). La serotipificación de las cepas aisladas se hizo según la técnica de Edwars y Ewing (6) y para la clasificación serológica de la especie, los cultivos fueron enviados al National Veterinary Services Laboratories, en Ames, Iowa, U.S.A. RESULTADOS Todos los hisopados cloacales y sueros de las aves analizadas, durante el período precedente a la inoculación, resultaron negativas a Salmonellas por aislamiento y detección de anticuerpos. Las aves controles permanecieron negativas a la excreción de Salmonellas y producción de anticuerpos durante el desarrollo del experimento. De las 72 muestras de hisopados cloacales, correspondientes a las aves expuestas (grupo A), 18 resultaron bacteriológicamente positivas a S. saint- paul, lo cual representa un porcentaje de 25,1 de excreción. En el Cuadro 1 podemos observar que la excreción de S. saint-paul comenzó el tercer día post-exposición y que en la mayoría de los casos, dicha excreción se detectó consecutivamente el tercer y quinto día (aves, Nos. 4, 5, 9, 10, 11 y 12). El ave No.7, a diferencia del resto, se mantuvo como excretora durante toda la prueba. De las aves 1, 2, 3, 6 y 8, no se recuperó la Salmonella en ningún momento. En cuanto a las manifestaciones clínicas, las aves solo presentaron diarrea, con una curva de producción sin alteraciones significativas, y no se registró ninguna mortalidad. A la necropsia, todas las aves presentaron buen estado de carne. En la No.3, se observaron huevos con superposición de cáscara, retenidos en la cavidad abdominal; el ave No.6 presentó cuatro huevos bien formados, y retenidos en la cavidad abdominal. El 83,3%, de las aves, presentaron lesiones en el tracto reproductor, observándose óvulos hemorrágicos flácidos y rotos. El 41,6%, presentaron hemorragias en el oviducto y en el 100% de las aves se observaron tonsilas cecales hemorrágicas (ver Cuadros 2 y 3 y Figuras 1 al 3). Como se puede observar en el Cuadro 4, S. saint-paul se recuperó solamente de ciegos y tonsilas cecales del ave No.1 ya partir de tonsilas cecales del ave No.2, el resto de las muestras resultaron negativas al aislamiento de S. saint-paul. Las cepas aisladas fueron corroboradas como pertenecientes a la serovariedad Salmonella saint-paul en el National Veterinary Service, Laboratories, Ames, Iowa, U .S.A. DISCUSIÓN El aislamiento de Salmonella saint-paul, a partir de los cultivos de hisopados cloacales de las aves expuestas, comenzó el tercer día post- inoculación, detectándose el mayor número de aves positivas en la tercera y quinta toma de muestra, es decir, en los inicios de la infección, lo cual apoya lo señalado por Brown et al., (3), quienes encuentran la mayor recuperación del germen en los primeros días de la infección, por otra parte la permanencia de aves negativas al cultivo de hisopados cloacales durante todo el experimento y la frecuencia de aves con excreción intermitente, coinciden con lo señalado por Brown et al., (3), Olesiuk et al., (13), Williams y Whittemore (24), Snoeyenbos et al (16) y Baker et al (l), quienes también encontraron la mayor detección de aves infectadas en los primeros días y una excreción intermitente. Las aves presentaron diarrea como único signo clínico, lo cual indica una infección entérica en las mismas. La retención de huevos en la cavidad abdominal, las lesiones en los ovarios, oviducto y tonsilas cecales, observadas a la necropsia, coinciden con los hallazgos de Kashiwasaki et al (11), Brown et al (3) y Thain y Cullen (17) cuando inocularon aves adultas con Salmonella typhimurium, lo cual confirma el efecto patógeno de las Salmonellas paratifoides sobre el tracto reproductor y el tracto intestinal. La variación poco significativa en la curva de producción, coincide con lo señalado por Baker et al (1), Kashiwasaki et al(11), Lister (12), Hopper (9). Sin embargo, hay señalamientos sobre disminución en la producción de huevos en aves expuestas con S. enteritidis (8), cuando se compararon con el lote control.
SUMMARY The pathogenicity of Salmonella saint-paul was tested in 48 week old breeder hens. They were inoculated orally during 12 consecutive days with a dose of 1 x 105 germs aproximately. The exposed hens only showed diarrhea with a production curve without significative alteration and no mortality was registered. At necropsy, it was observed egg retention in the abdominal cavity of the hens. In one of them it was observed overlayed egg shell, 83.3% of the hens presented hemorragic, flaccid and broken ovules in the abdominal cavite and 41,6% had hemorragic oviducts. One hundred percent of the hens showed hemorragic cecal tonsils. S. saint-paul was recovered from cecal tonsils and cecum of one hen, and only from the cecum of another . Cultures from livers, ovulles and oviducts were negative in all the cases. BIBLIOGRAFÍA
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