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Veterinaria Tropical. Vol. 18:59-67. 1993 ESTUDIO SEROL�GICO DE LA SEUDORRABIA EN VENEZUELA Nelva
Morella de Rolo*, Luisa Palencia*, Nancy de L�pez*, Carlos Mar�n* y Socorro de Sifontes*
* FONAIAP. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias. |
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RESUMEN Se evaluaron 1273 sueros de porcinos no vacunados, procedentes de 77 granjas organizadas, ubicadas en nueve estados; se utiliz� la Prueba de Aglutinaci�n de L�tex (PAL), para detectar anticuerpos contra el virus de la Seudorrabia (VS). Se observ� en total 63% de animales reactores. El mayor n�mero de positivos correspondi� a los provenientes del estado Cojedes con 89,56%, en el estado Miranda 86,6%, Carabobo 73,5% y Aragua 66,08%. La evaluaci�n por granjas determina que de 77 analizadas, 58 resultaron con reactores (75,32%). Al realizar la comparaci�n de la t�cnica de PAL con la de ELISA, se encontr� 86,79% de concordancia en los resultados, utilizando Mc Nemar se establece una concordancia significativa entre ambas pruebas, con un error standard del 5%, lo cual le da validez a la encuesta realizada por p AL, en virtud de ser ELISA una de las t�cnicas de m�s alta sensibilidad. Desde el punto de vista serol�gico la enfermedad est�-ampliamente distribuida en el pa�s, siendo el estado Cojedes el de mayor incidencia, el cual ha incrementado en forma progresiva la poblaci�n porcina. INTRODUCCI�N La seudorrabia es una enfermedad muy contagiosa, que determina alta mortalidad principalmente a cerdos en las primeras semanas de vida, dependiendo qe la virulencia de la cepa (7). El primer se�alamiento de la enfermedad en literatura cient�fica lo realiza Aujeszky en 1902 (2). El agente causal de la enfermedad es el Herpesvirus suis 1, perteneciente a la familia Herpesviridae, g�nero Herpesvirus suis (10). En el cerdo hay variedad de clases de inmunoglobulinas (IgM, IgA, IgG) (7, 8), encontr�ndose heterogeneidad en las sub clases de la IgG (6). Despu�s de la infecci�n natural con seudorrabia, las cerdas adquieren inmunidad, la cual es transferida a su descendencia a trav�s del calostro, estos anticuerpos maternos, principalmente del tipo IgG (1), persisten en los cerdos hasta la 5- 7 semanas de vida. Los cerdos recuperados de la infecci�n pueden ser portadores latentes del virus y posteriormente, en una situaci�n de stress convertirse en excretores activos del virus (3, 4). La reactivaci�n experimental del virus puede inducirse mediante la administraci�n de corticosteroides (3, 12). En Venezuela, el primer diagn�stico de la seudorrabia fue realizado en 1951 por Divo et al, (5). La identificaci�n del virus se ha continuado realizando mediante la t�cnica de inmunofluorescencia directa y por la inoculaci�n de ratones lactantes (11); sin embargo, no existe en el pa�s una campa�a de vacunaci�n contra la enfermedad ni est�n establecidas medidas de control desde el punto de vista oficial. Diversos m�todos serol�gicos se aplican actualmente para medir la inmunidad de tipo humoral; �stos son: seroneutralizaci�n, contrinmunoelectrof�resis, inmunodifusi�n, ELISA (12) y Prueba de Aglutinaci�n de L�tex (PAL), la cual es altamento, sensible y espec�fica, encontr�ndose una sensibilidad de 100% comparada con ELISA y seroneutralizaci�n (9). El objetivo de este trabajo es demostrar la distribuci�n de la seudorrabia en el pa�s, mediante un estudio serol�gico, as� como comparar las t�cnicas de PAL con ELISA. MATERIALES Y M�TODOS Muestras. Se tomaron muestras en 77 granjas organizadas ubicadas en nueve estados, en las cuales no se evidencia el uso de vacuna contra seudorrabia. Todas las muestras correspondieron a hembras adultas, las cuales se sangraron en la vena marginal de la oreja, para obtenci�n del suero sangu�neo. Se obtuvo un total de 1.273 sueros porcinos de animales no vacunados. Pruebas utilizadas. Prueba de Aglutinaci�n de L�tex (PAL) y ELISA, ambas realizadas a nivel de laboratorio. PAL. Se utiliz� Kit Comercial de Viral Antigens Inc. La muestra se diluye 1:4, de esta mezcla se colocan 50 UI sobre una placa de vidrio y se le agrega una gota de ant�geno (perlas de l�tex sensibilizados con el virus VS), se mezcl� y se hizo rotaci�n de la placa durante ocho minutos. La lectura se hace macrosc�picamente bajo luz incidente, la presencia de grumos de aglutinaci�n determina la positividad. ELISA. Se us� Kit Comercial de Laboratorio Norden Lab Ease ADV (AUJESZKY DISEASE VIRUS), el cual contiene las microplacas de polyvynil choloride cubiertas con el ant�geno ADV sobre las columnas impares y el control de ant�geno sobre las columnas pares. El suero se trabaj� en una diluci�n 1:40, usando adem�s anti IgG porcina conjugada con peroxidasa y la soluci�n de substrato fue ABTS (2,2-Azinodi) (3-Ethylben- zothiazoline-6 sulfonic acid). La lectura se realiz� en un lector Titertek Multiskan Plus a 405 nm. La densidad �ptica para cada suero sobre el pozo conteniendo el ant�geno, es corregido restando la densidad �ptica del pozo conteniendo el control de ant�geno negativo. El umbral de positividad estuvo dado por el doble del promedio de la densidad �ptica de suero referencia negativo. An�lisis Estad�stico. La evaluaci�n de los datos para determinar la significancia de los resultados se realiz� por el m�todo de Mc Nemar, citado por Wiedenhofer (13). RESULTADOS Y DISCUSI�N En el Cuadro 1 se observa que de 1273 sueros procesados, 802 resultaron reaccionantes a la t�cnica PAL. En los estados de mayor poblaci�n porcina los porcentajes de positividad fueron altos, 66,08% en Aragua 73,54 en Carabobo; 82,6% en Miranda y 89,56% en Cojedes. Es importante destacar que en el Estado Cojedes se ha venido incrementando la poblaci�n porcina en forma progresiva, sin tomar en cuenta el estado sanitario de los pie de cr�a.
En los estados Lara y Yaracuy, las muestras procesada positividad. En los estados Zulia y Barinas se encontr� solo Un reaccionante por granja y aun cuando este valor es bajo, es importante en virtud de conocer la caracter�stica del virus responsable de que la enfermedad permanezca en estado de latencia para reactivarse posteriormente y reexcretar virus (3,4), lo cual puede conllevar al establecimiento de un foco de la enfermedad, si no se elimina el animal infectado. En el Cuadro 2 se observa que el 75,32% de las granjas evaluadas resultaron positivas, de los cuatro estados m�s importantes como productores porcinos, Cojedes result� con el m�s alto porcentaje de granjas positivas (100%); Carabobo y Aragua presentaron 78,94 y 70%, respectivamente. En Miranda se observ� 90% de granjas reaccionantes. Cabe destacar que de estos pie de cr�a se est� poblando el estado Cojedes.
Por no haber se�alamiento de vacunaci�n en las granjas, estos resultados serol�gicos positivos hacen pensar en la actuaci�n de un virus de campo que determina esta conversi�n serol�gica espec�fica. La distribuci�n de la enfermedad en el pa�s de acuerdo con el muestreo realizado, se observa en la Figura 1. Se realiz� un estudio comparativo entre las t�cnicas PAL y ELISA, a fin de demostrar la correlaci�n existente entre ambas t�cnicas y dar validez a los resultados presentados en este estudio, por ser ELISA una de las t�cnicas m�s sensibles y espec�ficas (12). En el Cuadro 3 se observa que de 181 sueros evaluados por ambas t�cnicas, 157 (86, 7%) presentaron concordancia en loS resultados. En 13,3% se observ� discordancia, a diferencia de lo se�alado por Larios F. et al en 1989 (9), el cual indica 100% de concordancia en ambas t�cnicas. Estos resultados discordantes, 7 animales P AL + /ELISA, pudieran explicarse por la capacidad de PAL para detectar anticuerpos IgM, que no se logra con ELISA, por usarse como conjugado anti-IgG porcina y se pudiera estar en presencia de infecciones recientes en las cuales los niveles de IgG a�n no son detectables y s�lo existe IgM que es el anticuerpo inicial en la respuesta inmune humoral. La discordancia PAL- ELISA + viene dado por la mayor sensibilidad de la ELISA.
Para la evaluaci�n estad�stica de comparaci�n de ambas t�cnicas se aplic� la prueba no param�trica de McNemar, resultando que el m�todo de diagn�stico PAL concuerda significativamente con ELISA con un error standard del 5% (Cuadro 4).
CONCLUSIONES Se puede decir que la seudorrabia est� ampliamente distribuida en el pa�s, en la mayor�a de las entidades federales evaluadas, con un porcentaje de positividad alto en los estados con mayor poblaci�n porcina y que los resultados obtenidos son confiables, en virtud de la concordancia observada en la comparaci�n de las t�cnicas PAL-ELISA. Por otra parte, PAL es m�s econ�mica y r�pida para ser utilizada como diagn�stico de rutina. Es importante destacar, la relaci�n de movilizaci�n de animales de Miranda a Cojedes, los cuales son los estados con m�s alto porcentaje de positividad; igualmente el porcentaje de granjas positivas fue alto de 100 Cojedes y 90 Miranda. SUMMARY Serum samples from 1273 non vaccinated porcine were evaluated, the samples were from 77 organic farms located in 9 States using the latex aglutination test (LAT), for the detection of antibodies against Pseudorabies virus (PRV). It was observed 63% reactor animals, the major positivity came from Cojedes state 89,56%, Miranda state 82,6%, Carabobo state 73,5% and Aragua state 66,08%. Evaluations at farm level, indicated that 58 out of 77 farms resulted with reactors (73,32). The comparison between LAT and ELISA utilizing McN emar test, determined 86,79% concordance, estabilish- ing significative concordance between both techniques with standard error of 5%, these results validated the survey with LAT , because the ELISA are the highest sensitivy test. In conclusion, from the serological point of view, the disease has extensive distribution in the country, with the highest per- centage in the Cojedes State, where the porcine population has been increas- ing progresively. BIBLIOGRAF�A
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