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Veterinaria Tropical. Vol. 18:59-67. 1993 ESTUDIO SEROLÓGICO DE LA SEUDORRABIA EN VENEZUELA Nelva
Morella de Rolo*, Luisa Palencia*, Nancy de López*, Carlos Marín* y Socorro de Sifontes*
* FONAIAP. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias. |
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RESUMEN Se evaluaron 1273 sueros de porcinos no vacunados, procedentes de 77 granjas organizadas, ubicadas en nueve estados; se utilizó la Prueba de Aglutinación de Látex (PAL), para detectar anticuerpos contra el virus de la Seudorrabia (VS). Se observó en total 63% de animales reactores. El mayor número de positivos correspondió a los provenientes del estado Cojedes con 89,56%, en el estado Miranda 86,6%, Carabobo 73,5% y Aragua 66,08%. La evaluación por granjas determina que de 77 analizadas, 58 resultaron con reactores (75,32%). Al realizar la comparación de la técnica de PAL con la de ELISA, se encontró 86,79% de concordancia en los resultados, utilizando Mc Nemar se establece una concordancia significativa entre ambas pruebas, con un error standard del 5%, lo cual le da validez a la encuesta realizada por p AL, en virtud de ser ELISA una de las técnicas de más alta sensibilidad. Desde el punto de vista serológico la enfermedad está-ampliamente distribuida en el país, siendo el estado Cojedes el de mayor incidencia, el cual ha incrementado en forma progresiva la población porcina. INTRODUCCIÓN La seudorrabia es una enfermedad muy contagiosa, que determina alta mortalidad principalmente a cerdos en las primeras semanas de vida, dependiendo qe la virulencia de la cepa (7). El primer señalamiento de la enfermedad en literatura científica lo realiza Aujeszky en 1902 (2). El agente causal de la enfermedad es el Herpesvirus suis 1, perteneciente a la familia Herpesviridae, género Herpesvirus suis (10). En el cerdo hay variedad de clases de inmunoglobulinas (IgM, IgA, IgG) (7, 8), encontrándose heterogeneidad en las sub clases de la IgG (6). Después de la infección natural con seudorrabia, las cerdas adquieren inmunidad, la cual es transferida a su descendencia a través del calostro, estos anticuerpos maternos, principalmente del tipo IgG (1), persisten en los cerdos hasta la 5- 7 semanas de vida. Los cerdos recuperados de la infección pueden ser portadores latentes del virus y posteriormente, en una situación de stress convertirse en excretores activos del virus (3, 4). La reactivación experimental del virus puede inducirse mediante la administración de corticosteroides (3, 12). En Venezuela, el primer diagnóstico de la seudorrabia fue realizado en 1951 por Divo et al, (5). La identificación del virus se ha continuado realizando mediante la técnica de inmunofluorescencia directa y por la inoculación de ratones lactantes (11); sin embargo, no existe en el país una campaña de vacunación contra la enfermedad ni están establecidas medidas de control desde el punto de vista oficial. Diversos métodos serológicos se aplican actualmente para medir la inmunidad de tipo humoral; éstos son: seroneutralización, contrinmunoelectrofóresis, inmunodifusión, ELISA (12) y Prueba de Aglutinación de Látex (PAL), la cual es altamento, sensible y específica, encontrándose una sensibilidad de 100% comparada con ELISA y seroneutralización (9). El objetivo de este trabajo es demostrar la distribución de la seudorrabia en el país, mediante un estudio serológico, así como comparar las técnicas de PAL con ELISA. MATERIALES Y MÉTODOS Muestras. Se tomaron muestras en 77 granjas organizadas ubicadas en nueve estados, en las cuales no se evidencia el uso de vacuna contra seudorrabia. Todas las muestras correspondieron a hembras adultas, las cuales se sangraron en la vena marginal de la oreja, para obtención del suero sanguíneo. Se obtuvo un total de 1.273 sueros porcinos de animales no vacunados. Pruebas utilizadas. Prueba de Aglutinación de Látex (PAL) y ELISA, ambas realizadas a nivel de laboratorio. PAL. Se utilizó Kit Comercial de Viral Antigens Inc. La muestra se diluye 1:4, de esta mezcla se colocan 50 UI sobre una placa de vidrio y se le agrega una gota de antígeno (perlas de látex sensibilizados con el virus VS), se mezcló y se hizo rotación de la placa durante ocho minutos. La lectura se hace macroscópicamente bajo luz incidente, la presencia de grumos de aglutinación determina la positividad. ELISA. Se usó Kit Comercial de Laboratorio Norden Lab Ease ADV (AUJESZKY DISEASE VIRUS), el cual contiene las microplacas de polyvynil choloride cubiertas con el antígeno ADV sobre las columnas impares y el control de antígeno sobre las columnas pares. El suero se trabajó en una dilución 1:40, usando además anti IgG porcina conjugada con peroxidasa y la solución de substrato fue ABTS (2,2-Azinodi) (3-Ethylben- zothiazoline-6 sulfonic acid). La lectura se realizó en un lector Titertek Multiskan Plus a 405 nm. La densidad óptica para cada suero sobre el pozo conteniendo el antígeno, es corregido restando la densidad óptica del pozo conteniendo el control de antígeno negativo. El umbral de positividad estuvo dado por el doble del promedio de la densidad óptica de suero referencia negativo. Análisis Estadístico. La evaluación de los datos para determinar la significancia de los resultados se realizó por el método de Mc Nemar, citado por Wiedenhofer (13). RESULTADOS Y DISCUSIÓN En el Cuadro 1 se observa que de 1273 sueros procesados, 802 resultaron reaccionantes a la técnica PAL. En los estados de mayor población porcina los porcentajes de positividad fueron altos, 66,08% en Aragua 73,54 en Carabobo; 82,6% en Miranda y 89,56% en Cojedes. Es importante destacar que en el Estado Cojedes se ha venido incrementando la población porcina en forma progresiva, sin tomar en cuenta el estado sanitario de los pie de cría.
En los estados Lara y Yaracuy, las muestras procesada positividad. En los estados Zulia y Barinas se encontró solo Un reaccionante por granja y aun cuando este valor es bajo, es importante en virtud de conocer la característica del virus responsable de que la enfermedad permanezca en estado de latencia para reactivarse posteriormente y reexcretar virus (3,4), lo cual puede conllevar al establecimiento de un foco de la enfermedad, si no se elimina el animal infectado. En el Cuadro 2 se observa que el 75,32% de las granjas evaluadas resultaron positivas, de los cuatro estados más importantes como productores porcinos, Cojedes resultó con el más alto porcentaje de granjas positivas (100%); Carabobo y Aragua presentaron 78,94 y 70%, respectivamente. En Miranda se observó 90% de granjas reaccionantes. Cabe destacar que de estos pie de cría se está poblando el estado Cojedes.
Por no haber señalamiento de vacunación en las granjas, estos resultados serológicos positivos hacen pensar en la actuación de un virus de campo que determina esta conversión serológica específica. La distribución de la enfermedad en el país de acuerdo con el muestreo realizado, se observa en la Figura 1. Se realizó un estudio comparativo entre las técnicas PAL y ELISA, a fin de demostrar la correlación existente entre ambas técnicas y dar validez a los resultados presentados en este estudio, por ser ELISA una de las técnicas más sensibles y específicas (12). En el Cuadro 3 se observa que de 181 sueros evaluados por ambas técnicas, 157 (86, 7%) presentaron concordancia en loS resultados. En 13,3% se observó discordancia, a diferencia de lo señalado por Larios F. et al en 1989 (9), el cual indica 100% de concordancia en ambas técnicas. Estos resultados discordantes, 7 animales P AL + /ELISA, pudieran explicarse por la capacidad de PAL para detectar anticuerpos IgM, que no se logra con ELISA, por usarse como conjugado anti-IgG porcina y se pudiera estar en presencia de infecciones recientes en las cuales los niveles de IgG aún no son detectables y sólo existe IgM que es el anticuerpo inicial en la respuesta inmune humoral. La discordancia PAL- ELISA + viene dado por la mayor sensibilidad de la ELISA.
Para la evaluación estadística de comparación de ambas técnicas se aplicó la prueba no paramétrica de McNemar, resultando que el método de diagnóstico PAL concuerda significativamente con ELISA con un error standard del 5% (Cuadro 4).
CONCLUSIONES Se puede decir que la seudorrabia está ampliamente distribuida en el país, en la mayoría de las entidades federales evaluadas, con un porcentaje de positividad alto en los estados con mayor población porcina y que los resultados obtenidos son confiables, en virtud de la concordancia observada en la comparación de las técnicas PAL-ELISA. Por otra parte, PAL es más económica y rápida para ser utilizada como diagnóstico de rutina. Es importante destacar, la relación de movilización de animales de Miranda a Cojedes, los cuales son los estados con más alto porcentaje de positividad; igualmente el porcentaje de granjas positivas fue alto de 100 Cojedes y 90 Miranda. SUMMARY Serum samples from 1273 non vaccinated porcine were evaluated, the samples were from 77 organic farms located in 9 States using the latex aglutination test (LAT), for the detection of antibodies against Pseudorabies virus (PRV). It was observed 63% reactor animals, the major positivity came from Cojedes state 89,56%, Miranda state 82,6%, Carabobo state 73,5% and Aragua state 66,08%. Evaluations at farm level, indicated that 58 out of 77 farms resulted with reactors (73,32). The comparison between LAT and ELISA utilizing McN emar test, determined 86,79% concordance, estabilish- ing significative concordance between both techniques with standard error of 5%, these results validated the survey with LAT , because the ELISA are the highest sensitivy test. In conclusion, from the serological point of view, the disease has extensive distribution in the country, with the highest per- centage in the Cojedes State, where the porcine population has been increas- ing progresively. BIBLIOGRAFÍA
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