Veterinaria Tropical 19: 3-15. 1994

SUSCEPTIBILIDAD in vitro EN CEPAS DE Campylobacter sp 
DE ORIGEN SUINO A 19 AGENTES ANTIMICROBIANOS

Yuraima Pineda*, Aura Gallardo*, Antonia Clavijo*, Fanny Méndez* y Carmen Velásquez*

*FONAIAP Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias
Instituto de Investigaciones Veterinarias
Apdo. 70. Maracay 2101. Venezuela

Recibido: mayo 11, 1993

RESUMEN

El análisis de los determinantes de, resistencia a los agentes antimicrobianos en cepas de Campylobacter sp., aisladas de cerdos con enteritis proliferativa, mostraron que el 100% de las cepas resultaron sensibles a enrofioxacina y gentamicina, con valores de CMI significativamente bajos. Todas las cepas exhibieron resistencia a más de cinco de los agentes utilizados, siendo frecuente para lincomicina; penicilina; trimetoprin; cefalotina (93,75%); ceftiofur (93,75%); trimetoprin/sulfametoxazole (87,5%); tetracielina (81,25%); estreptomicina (75%); kanamicina (62,5%); eritroniicina (56,25%); ampicilina (50%) y triple sulfa (50%), con valores de CMI mayores de 250 mg/ml. Se detectaron 14 patrones de resistencia diferentes que incluyeron de 6 a 15 marcadores.

INTRODUCCIÓN

Campylobacter sputorum subsp. mucosalis y C. hyointestinalis han sido aislados del intestino del cerdo en constante asociación con la enteritis proliferativa (7, 12, 20). La enteritis proliferativa del cerdo es una compleja enfermedad caracterizada por lesiones proliferativas del intestino con invasión intracelular de los enterocitos que afecta a cerdos de todas las edades (21,22).

El tratamiento más comúnmente utilizado para el control de este proceso infecciosos es la terapia antimicrobiana, cuya efectividad ha comenzado a verse reducida por la aparición de cepas bacterianas resistentes. Ello probablemente como consecuencia del empleo intensivo de antimicrobianos en la cría porcina como promotores, preventivos y terapéuticos (4, 14, 16, 17).

En los últimos años, algunas investigaciones han tratado el tema de la sensibilidad de Campylobacter a los antimierobianos y se ha demostrado que existen diferencias geográficas, así como un incremento en la frecuencia de resistencia a los antimierobianos de uso más común en la práctica médica y veterinaria (9, 18, 20).

El género Campyiobacter puede mantener una variedad de determinantes de resistencia y se ha comprobado que gran parte de ésta puede ser transmisible por ser mediada por plásmidos (1, 4, 23, 27), siendo frecuentemente observada para tetraciclina (23, 25, 26) y para kanamicina (27).

Desde que se determinó la naturaleza infecciosa de la resistencia en las bacterias, muchos esfuerzos se han orientado al estudio de este fenómeno, por lo que el conocimiento de los patrones de resistencia en bacterias patógenas representa un valioso aporte al respecto.

La limitada información disponible referente a los patrones de susceptibilidad de Campylobacter de origen suino en el mundo y prácticamente desconocido en nuestro medio geográfico, motivó la realización de este trabajo, con el propósito de determinar el efecto in vitro de 19 agentes antimicrobianos contra cepas Campylobacter sp., de origen suino aisladas en el país.

MATERIALES Y MÉTODOS

Cepas bacterianas. Se analizaron 16 cepas de Campylobacter aislados por raspado de la mucosa del ileón de cerdos con enteritis profilerativa, obtenidas del cepario del Laboratorio de Bacteriología del Instituto de Investigaciones Veterinarias CENIAP-FONAIAP.

Susceptibilidad a los agentes antimieroblanos. Se analizó la susceptibilidad in vitro de las cepas frente a 19 antimierobianos mediante la técnica de difusión en disco y la técnica de difusión en agar. La técnica de difusión en agar se realizó según lo establecido por Bauer et al (2). El inóculo fue un cultivo puro de cada cepa en medio tioglicolato, a una concentración similar a un patrón de Me Farland No. 1, sembrado en placas de agar sangre ovina al 5% e incubado a 37°C por 48 horas en una atmósfera microaerofílica. Los antimicrobianos utilizados y sus concentraciones fueron: ácido nalidíxico (An 30 µg); ampicilina (Am 10 µg); cefatotina (Cf 30µg); ceftiofur (Ce 30 µg); colimicina (Cl 10 µg); cloranfenicol (Cn 30 µg); enrofioxacina (Ef 5 µg); eritromicina (Er 15µg); estreptomicina (Es 10µg); gentamicina (Gm 10 µg); kanamicina (Km30 µg); lincomicina (Lm 2 µg); neomicina (Nm 30,µg); penicilina (Pn 10 unid); polimixin B (PB 300 unid); tetraciclina (Te 30 µg); trimetoprin (Tm 5 µg); trimetoprin-sulfametoxazol (Tsc 25µg); triple sulfa (Ts 300µg).

La técnica de dilución en agar se realizó para correlacionar los niveles de resistencia con las concentraciones mínimas inhibitorias,                 CMI (5, 19). El inóculo igualmente fue cultivo puro de cada cepa en medio tiogliocolato a una concentración similar a un patrón de Mc Farlan No. 1. Inoculado en placas dobles de agar Mufier Hinton sin sangre, adicionado del antimicrobiano correspondiente; el inóculo se colocó mediante el uso de un replicador múltiple (Cathra International). Las placas fueron inoculadas de las más baja a la más alta concentración del agente antimierobiano. Placas sin antimicrobiano fueron inoculadas al comienzo de cada serie como control de la viabilidad de las cepas. La incubación se realizo a 37°C por 48 h en atmósfera microaerofilica, incubaciones más prolongadas no son recomendadas especialmente para colimicina y polimixin (12). La CMI fue definida como la más baja concentración del agente antimicrobiano que inhibe el crecimiento bacteriano. Los antimicrobianos utilizados y sus concentraciones fueron: ácido nalidíxico, ampicifina, cefalotina, colimicina, cloranfenicol, enrofioxacina, eritromicina, estreptomicina, gentamicina, penicilina, tetraciclina y trimetoprin, las concentraciones fueron seriadas para cada uno expresados en µg/ml 25-50-125-250-500-750 y 1000.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

La resistencia a los agentes antimierobianos ha sido señalada en cepas de Campylobacter de origen humano y animal (4, 10, 18, 28, 29, 30). Los resultados obtenidos demuestran que 100% de las cepas exhibieron resistencia múltiple, esta resistencia es señalada al menos a seis y máximo a quince agentes antimicrobianos (Cuadro 1).

Fueron determinados 14 patrones de resistencia bastante complejos, los más frecuentes incluyeron resistencia para diez marcadores y  fueron para Cf, Ce, Er, Es, Lm, Pn, Tc, Tm, Tsx, Ts, y Cf, Ce, Es, Km, Lín, Nm, Pn, Tc, Tm y Tsx con una frecuencia de 12,5% para cada patrón    (Cuadro l). Esta información demuestra que en las cepas analizadas la resistencia múltiple es más frecuente que la simple, lo que coincide con lo expresado por otros autores (8, 10, 31, 32). Ello puede estar relacionado con el efecto de elementos genéticos translocables denominados transposones que son responsables de la acumulación de genes de resistencia en los plásmidos de resistencia (4, 6).

Todas las cepas fueron resistentes a penicilina, trimetoprin y lincomicina (Cuadro 2), alcanzando valores de concentraciones mínimas inhibitorias (CMI) mayores de 250 µg/ral (Cuadro 3). Esto podría ser consecuencia del uso ampliamente difundido de estos agentes como aditivos de los alimentos para consumo de cerdos.

Los índices elevados de frecuencia de resistencia señalados para cefalotina, ceftiofur, trimetoprin-sulfametoxazole, tetracielina, estreptomicina, kanamicina, eritromicina, ampicilina y triple sulfa (Cuadro 2). Alcanza valores de CMI de 1000 y mayores de 1000 para eritromicina y estreptomicina (Cuadro 3). Estos resultados se pueden asociar a su amplio uso de estos antimicrobianos a nivel veterinario. Esta información coincide con resultados que revelan la amplia difusión de la resistencia en cepas de Campylobacter (8, 10, 11, 21, 28, 29, 30).

Existen evidencias convincentes que tanto dosis terapéuticas como subterapéuticas causan incrementos de la resistencia en la flora intestinal de los animales, la cual no es específica al antimicrobiano utilizado, sino también otros antimicrobianos (16).

Ha sido ampliamente documentado que los antibióticos B lactámicos tienen reducida efectividad contra las cepas de Campylobacter, por lo que no deben considerarse como droga de elección en el tratamiento de infecciones causadas por Campylobacter (15, 28, 30).

Existen estudios que indican que los antimicrobianos del grupo de los macrólidos poseen de moderada a baja actividad contra Campylobacter (4, 10, 18) hecho que coincide con nuestros reportes.

Sin embargo Gebhart et al. (8) señalan a eritromicina con una alta actividad para los Campylobacter de origen suino.

En este trabajo se observó que el agar Muller Hinton no ejerció efecto en la actividad del trimetoprin, por lo que no se consideró necesario adicionar al medio conteniendo este antibiótico, sangre de caballo lisada (3). Aunque existen evidencias que indican una disminución en la actividad de este antimicrobiano en Agar Muller Hinton (14). Sin embargo las CMI de trimetoprin determinadas en Huller Hinton libre de sangre, en este estudio fueron similares a las de otras investigaciones (11, 15, 18).

La naturaleza plasmídica ha sido señalada para la mayoría de estos determinantes de resistencia y en cepas de Campylobacter ha sido muy específica para tetraciclina (24, 25, 26) y kanamicina (23). Para esta última se ha demostrado que los genes de resistencia fueron adquiridos en forma natural a partir de donantes Gram positivos (gen aph A-3) y de donantes Gram negativos (gen aph (A-7)). Toda esta información nos sugiere que la diseminación de estos determinantes de resistencia puede ser intra e interespecie y está garantizada en la población porcina, más aún cuando existen investigaciones que indican que la prevalencia de plásmidos R en cepas de Campylobacter de origen suino es alta (1, 4,23), con aislamientos que portan hasta 15 perfiles de plásmidos R (4).

Los antimicrobianos con más alta actividad contra las cepas de Campylobacter fueron enrofioxacina y gentamicina al exhibir 100% de susceptibilidad (Cuadro 2) alcanzando niveles de CMI significativamente bajos especialmente para gentamicina (Cuadro 3). Estos resultados coinciden con lo señalado por otros autores (8, 9 11, 13,29). En cuanto a la susceptibilidad observada para estos dos antimicrobianos se puede aseverar que la misma se debe a que su uso es relativamente reciente y poco difundido en el país. Por lo que podrían representar una alternativa en el tratamiento de la enteritis proliferativa del cerdo.

En cuanto al resto de los antimicrobianos que mostraron cierta susceptibilidad, el cloranfenicol exhibió una baja frecuencia de resistencia (6,25%) similar a lo presentado por Gebhart et al (8) y Karmali et al (12). Sin embargo, su uso debe limitarse por altos riesgos y efectos colaterales.

Igualmente se observó una frecuencia de resistencia baja (Cuadro 2) para polimixin B (12,5%) y algo más elevada para ácido nalidímico (25%) y colimicina (37,5%). Información que coincide con lo señalado por otros autores (8, 13, 31, 32). Esto podría explicarse a que el origen de esta resistencia es cromosomal y a este hecho se une que estos agentes no son de un uso difundido en las explotaciones porcinas del país.

Es necesario mencionar que en este estudio no se observaron diferencias significativas para la mayoría de los antimicrobianos entre las dos técnicas utilizadas para determinar la susceptibilidad de las cepas coincidiendo con lo expresado por Karniali et al (11) y Haribaran et al (10) al considerar el método de difusión en disco como una técnica satisfactoria para determinar la susceptibilidad de estos aislamientos en la rutina de los laboratorios de diagnóstico. Mediante este estudio se pretende contribuir al conocimiento de la resistencia a los antimicrobianos en patógenos de interés veterinario.

AGRADECIMIENTO

Los autores agradecen al médico veterinario César Mata, por el suministro de los antimicrobianos utilizados en la determinación de las concentraciones mínimas inhibitorias.

SUMMARY

A survey of drug resistance was carried out in Campylobacter sp. strains isolated from pigs with proliferative enteritis. lt was found that 100% of isolates was susceptible to enrofioxacina and gentamicin with low MIC. Resistance to more of five agents was also exhibited by a 100% of strains, showing more frequency for lincomycin (100%); penicillin (100%); trimethoprim (100%); cephalothin (93,75%); ceftiofur (93,75%); trimethoprin-sulfametboxazole (87,5%); tetraeyeline (81,25%); streptomycyn (75%); kanamycin (62,5%); erythromicin (56,25%); ampicil" (50%); with the highest MIC of 250 mcglml. Fourteen resistance patterns inciuding from 6 to 15 markers were detected.

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