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Veterinaria Trop. 20:7-25. 1995. HALLAZGOS
ANATOMOPATOLÓGICOS OBSERVADOS Nelly Candelo de A.*, Elio Sogbe**, G. Erickson*** y Jesús Castañeda*.
* FONAIAP. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias. |
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RESUMEN Se estudiaron los efectos de la vacunación con una y dos dosis, de una vacuna comercial contra el VPR, inactivada, en 69 cerdos de 10 semanas de edad, divididos en tres grupos. La protección fue evaluada comparando las lesiones macroscópicas y microscópicas encontradas en los pulmones de los animales vacunados y no vacunados. Las lesiones macroscópicas, en el grupo que recibió dos dosis fueron menores en comparación al grupo que recibió una dosis (P). Entre este último grupo y el grupo testigo no hubo diferencias estadísticas. En cuanto a las lesiones microscópicas, hubo también una reducción en el grupo que recibió dos dosis de la vacuna, no así en el grupo de una dosis, cuando se compararon con el grupo testigo. Los resultados confirman que la aplicación de dos dosis de vacuna contra el VPR tuvo un efecto altamente significativo, sustentando los aspectos anatomopatológicos observados.- INTRODUCCIÓN La pseudorrabia, causada por un alfaherpesvirus (3), es una enfermedad que afecta a la mayoría de los animales domésticos y silvestres. En la infección natural, los signos de la enfermedad varían de acuerdo con la especie animal y edad. Cerdos de todas las edades y razas son susceptibles al virus de la pseudorrabia (VPR). La infección puede cursar sub-clínicamente o con signos y síntomas clínicos leves, moderados o graves (8). Los signos clínicos característicos están referidos a problemas de los sistemas: respiratorio, nervioso y reproductivo, y dependen del tipo de cepa viral (7). Se han aislado diferentes cepas. Algunas tienen tropismo por el sistema nervioso central, causando incoordinación, temblores musculares y convulsiones. Otras afectan al sistema respiratorio originando rinitis, faringitis, tonsilitis y neumonía. Combinación de cepas nerviosas y respiratorias también han sido aisladas (3,12). No existen lesiones típicas y constantes para el diagnóstico postmorten de la enfermedad. El sistema nervioso presenta lesiones características, como congestión marcada de las meninges, exceso de líquido cerebro-espinal (13). También se ha descrito hemorragia y congestión de los ganglios linfáticos. En los casos que presentan prurito, se observa un considerable daño local de la piel y edema en el subcutáneo. En los pulmones se aprecia congestión, edema y áreas hemorrágicas. Se evidencia con frecuencia tonsilitis necrótica, faringitis traqueitis y eventualmente esofagitis (7). Los principales cambios observados radican a nivel del sistema nervioso central principalmente relacionados al cerebro. Los cambios consisten en una meningoencefalitis no supurativa y una leve mielitis (10). El VPR ataca y se multiplica en todos los tipos de células del pulmón, causando necrosis de los epitelios de los bronquios, bronquiolos y vías secundarias del aparato respiratorio. La necrosis se puede extender hasta la membrana basal y llega a destruir células del tejido muscular y conectivo subyacente (4). Estudios histopatológicos de las lesiones pulmonares causadas por el VPR han determinado que la alteración más importante es la necrosis, la cual se extiende ampliamente, observándose bronquitis necrótica, bronquiolitis y alveolitis con la presencia de cuerpos de inclusión en las células de la parte superior del tracto respiratorio (5). La neumonía necrótica constituye la lesión característica (15). Las extensiones de las lesiones neumónicas están directamente relacionadas con la dosis infectante de virus (4,5). El objetivo del presente trabajo fue demostrar las características clínico patológicas de una población suina de ocho semanas de edad, provenientes de una granja con antecedentes de VPR, vacunadas con dos esquemas de vacunación para apreciar así las diferencias con base en la descripción macroscópica y microscópica de las lesiones presentadas por grupos, en comparación con los animales testigos no vacunados. MATERIALES Y MÉTODOS Para los estudios realizados en la investigación se utilizó la vacuna comercial inactivada, importada, marca NORDEN, de la compañía Smithkline, Lote No. 6200000. El trabajo se realizó en una granja comercial ubicada en Aguas calientes, estado Carabobo, con antecedentes de la enfermedad. El grupo experimental estuvo conformado por 69 animales de ocho semanas de edad. Los animales se dividieron en tres grupos, formados por 23 animales cada uno:
A cada cerdo de los grupos A y B se les aplicó 2 mi de la vacuna por vía intramuscular (IM). Se realizaron observaciones semanales a los animales para constatar alguna sintomatología clínica, atribuible a la vacunación o a la enfermedad, incluyendo al grupo testigo, hasta las de 23 semanas, al término de la cual se le practicó la eutanasia a todos los animales, se procedió a realizar las necropsias para reconocer en cada uno de los animales las lesiones microscópicas de los pulmones. Estas se clasificaron según su ubicación y extensión en los diferentes lóbulos que conforman los pulmones: apical, cardíaco y diafragmático. Se tomaron muestras de pulmón, 2 cm2 aproximadamente, y se colocaron en recipientes con solución buffer formol al 10% durante 48 horas. Las muestras fijadas en formol fueron deshidratadas en soluciones alcohólicas de concentraciones crecientes e incluidas en parafinas; luego se hicieron secciones de 5μ; a 7μ, las cuales se colorearon con hematoxilina-eosina. Las secciones histológicas fueron evaluadas de acuerdo con las lesiones microscópicas de los bronquios, alvéolos, septos, tabiques interlobulillar , vasos y pleura. En el análisis estadístico se empleó el método de comparación de proporciones para un número menor de cien muestras (n < 100), utilizándose en la comparación de porcentajes. Para verificar la existencia o no de una posible relación entre dosis y número de lesiones, se empleó la prueba de Chi - Cuadrado (X2). El nivel se significación utilizado de 1% y 5%. RESULTADOS La aplicación de la vacuna comercial, por vía intramuscular contra el VPR, no provocó reacción adversa a nivel local, ni general, que afectara el estado de salud en los animales durante los días siguientes a la inoculación. Resultados macroscópicos En la Figura 10 se presenta el porcentaje de animales con lesiones macrosc6picas encontradas en los pulmones en el momento del sacrificio de los animales experimentales, a nivel de matadero. Se observa que 62,29% de los animales del grupo "A", que recibieron dos dosis de vacuna contra el VPR, presentaron lesiones, (Figuras 1, 2, 3); en los del grupo "B", que recibieron una dosis vacunal, 78,2% resultaron con lesiones (Figuras 4, 5,6) y el82,8% de los animales del grupo "C" (testigos) presentaron lesiones (Figuras 7, 8, 9). Estadísticamente hay diferencias significativas entre el grupo "A" y grupo "B" (P<0,01). Sin embargo, entre el grupo "B" y "C" no hubo diferencias significativas. Para verificar la existencia o no de una posible relación entre dosis y número de lóbulos comprometidos se realizó el análisis mediante la prueba de X2, obteniéndose un valor mayor (26,398), el correspondiente a la tabla de distribución crítica, para a = 0,01 y 2 grados de libertad (9,210), por lo que se concluye que existen evidencias estadísticas (P < 0,01) de relación entre dosis y lesiones, lo cual es inversamente proporcional.
El Cuadro 1 muestra los porcentajes por ubicación topográfica de los focos de consolidación neumónicas y hemorragias encontrados en la necropsia de los grupos A, B y C.
La comparación de los porcentajes de focos de consolidación neumónicas resultantes en el estudio macroscópico (Cuadro 2), demostraron que la presencia de lesiones en los lóbulos apical, cardíaco y lóbulos apical/cardíaco y cardíaco/diafragmático no presentaban diferencias significativas entre los tres grupos. Sin embargo, entre el grupo A y B, fue significativa la diferencia de lesiones neumónicas en el lóbulo diafragmático igual cuando se compara el grupo B v s C (P < 0,05). En la comparación de los grupos A y C, ambos se comportaron estadísticamente igual. Para la presencia de lesiones en los tres lóbulos a la vez (apical, cardiaca y diafragmática) existen diferencias altamente significativas cuando se compara A con B vs C (P < 0,05), pero no entre los grupos B y C.
Resultados microscópicos Las lesiones microscópicas encontradas a nivel de bronquios, alvéolos, neumocitos, septos, tabiques interlobulillar, vasos y pleura, se muestran en el Cuadro 3. Se observa el número de lesiones microscópicas encontradas en las muestras de pulmón recolectadas de los grupos experimentales A, B y C (Figuras 11 al 22). DISCUSIÓN En las lesiones encontradas en los pulmones de los cerdos, se observó que el grupo "A" (dos vacunaciones) presentó un menor grado de lesiones neumónicas que el grupo "B", (una vacunación) y el grupo testigo (Figura 10), notándose que la administración de dos dosis de la vacuna coincide con la reducción del grado de lesiones producidas en los pulmones atribuibles al VPR. El efecto de la aplicación de una dosis de esta vacuna inactivada no fue lo deseable, ya que comparándose con el grupo control, los grados de lesión fueron similares. Estos resultados concuerdan con los obtenidos por Alva et al. (1); Donaldson et al. (9) y Vannier (14).
Sin embargo, la severidad de estas lesiones pudiera depender de otros factores como lo es la vía de infección, pues se ha observado, en animales infectados por vía aerosol, que las lesiones presentadas son leves, en comparación a los infectados por vía nasal; en éstos se aprecia mayor grado de injuria (3). Otros factores son la talla de las partículas que contiene el virus, volumen y dosis del inoculado (15). La ubicación de las lesiones neumónicas se caracterizó por que en el grupo "A" (dos vacunaciones) los focos neumónicos se ubicaron con más frecuencia en un solo lóbulo y, con mayor incidencia, en el lóbulo cardíaco. No se apreciaron lesiones a nivel del lóbulo diafragmático. Los fenómenos hemorrágicos no estuvieron presentes en el grupo "B" (una vacunación) las lesiones se caracterizaron por comprometer a los tres lóbulos del pulmón, con presencia de hemorragias. Los focos neumónicos se ubicaron solamente en el lóbulo diafragmático hecho no observado en los " A" y "C". La presencia de lesiones ubicadas solamente en los lóbulos apical o cardíaco fue menor que en el grupo "A". El grupo "C" (sin vacunación) se caracterizó por la presencia de lesiones neumónicas que comprometían preferentemente a los lóbulos apical y cardíaco simultáneamente, aunque hubo animales que presentaron comprometido todo el pulmón, pero en menor número. Los eventos \\ hemorrágicos estuvieron presentes. No se notó lesión localizada únicamente en el lóbulo diafragmático, pero sí en el lóbulo cardíaco y con frecuencia. Por las características de las lesiones en los animales del experimento, que fueron más frecuentes en los lóbulos apical y cardíaco, se podría atribuir como agente causal de éstas al VPR, ya que según señalamientos, las lesiones producidas por el VPR son predominantes en estos lóbulos (5,2). Es de hacer notar que las lesiones primarias ocasionadas por el VPR se complican por la presencia de agentes bacterianos secundarios, modificándolas de acuerdo con el estado sanitario de los animales (15). Las lesiones microscópicas típicas en el pulmón, causadas por el VPR, se fundamentan principalmente en una necrosis difundida, no selectiva, que i- conduce a una bronquiolitis necrosante, bronquitis y alveolitis (2,6). Estas ,). lesiones pueden ser observadas los primeros en el animal; la necrosis y restauración de los tejidos ocurren entre el cuarto y sexto día de la infección, seguido por una organización y fibrosis que continúa por E). varias semanas (6). Hay cuerpos de inclusión prominentes en las células del tejido epitelial y conectivo, desde el primer día de la infección hasta el sexto día (5). Tomando en cuenta las observaciones de estos investigadores se infiere que las lesiones histopatológicas señaladas en este estudio, causadas posible- mente por el VPR, no fue posible observarlas debido a que transcurrió mucho tiempo entre la posible infección y el sacrificio de loS animales (23 semanas) y ya ha sido determinado que las lesiones se presentan sólo durante el período agudo de la enfermedad, es decir, durante un lapso de tiempo muy corto (seis días) (6). Es probable que un agente bacteriano secundario haya modificado las lesiones causadas por el virus, aumentando la severidad de éstas (15). Ello puede explicar que los hallazgos histopatológicos observados sean atribuibles a una complicación bacteriana secundaria, aunque no se realizó cultivo bacteriológico por no ser uno de los objetivos planteados. Sin embargo, en el Cuadro 3 se observa, dentro del grupo" A", una reducción en el número de lesiones microscópicas, en comparación con el grupo "B" y el grupo "C", indicando que la aplicación de las dos dosis de vacuna tuvo relación con la disminución del grado de lesión microscópica en el tejido pulmonar , al mantener intacta o conservada la capacidad inmunológica de los macrófagos alveolares, ayudando con esto a prevenir la invasión de entes bacterianos secundarios. Por otra parte, en los casos del grupo" A" que no muestran lesiones significativas, se apreció una hiperplasia folicular linfoide peribronquial que podría estar indicando una adecuada respuesta inmunológica postvacunal y justificaría la indemnidad del parénquima pulmonar ante las agresiones bacterianas. En este tipo de reacción linfoide señalada pudiese estar involucrado un problema de micoplasma, pero la ausencia de lesiones macroscópicas imputables a éste y de datos serológicos impide mayores conclusiones, de todas formas tampoco era el objetivo del presente estudio determinar incidencia de micoplasmosis y su posible asociación sobre un campo que requiere trabajos de investigación ulteriores. El grupo "B" y el grupo "C" no presentaron diferencia en cuanto al número de lesiones encontradas en cada grupo. Por lo tanto, el efecto de la aplicación de una dosis de vacuna no es el esperado e indica una minusvalía de los macrófagos alveolares para tolerar la injuria de agentes secundarios, tanto en los animales testigos como en los vacunados con una sola dosis. CONCLUSIONES
SUMMARY The effects of vaccination with one and two dosis commercial inactivated pseudorabies vaccine were studied in 69 pigs,ten weeks old. The pigs were divided in three groups. The protection was evaluated comparing the gross lessions and microscopic lessions in the lung between vaccinated and non vacinated pigs. The gross lessions fmdings and microscopic lessions in the group of animals vaccinated with two dosis, showed disminution of the severity when comparing these group of animals with the vaccinated with one dosis (p < 0.01). There were not statistics differences between the groups of vaccinated animals with one dosis and controls. BIBLIOGRAFÍA
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