Veterinaria Tropical 24(1): 47-53. 1999

APLICACION DEL ENSAYO INMUNOENZIMA TICO (ELISA-Ac/T: evansi) PARA LA DETECCION DE ANTICUERPOS ANTI Trypanosoma vivax EN EL ESTADO BOLIVAR 

Emir Espinoza*, Nersa González** , Trina Perrone*** , Pedro Aso ***
 Luis Hidalgo*** y Luis Barasarte****

* Investigador. Centro de Investigaciones del Estado Guárico.
 Carretera Nacional, vía Calabozo. Apdo. 14. Edo. Guárico. Venezuela
 ** Profesora. Universidad Simón Rodríguez.
Rectorado. Apdo. 3690. Caracas. Venezuela.
*** Profesores. Universidad Simón Bolívar. Valle de Sartenejas.
 Apdo. 89000.Baruta, Estado Miranda. Venezuela.
 **** Colegio de Médicos Veterinarios del Estado Bolívar.

Recibido: enero 06, 1999

RESUMEN

Sueros bovinos recolectados entre 1996 y 1997 en tres localidades del estado Bolívar, Sifontes, El Palmar y Río fueron utilizados para la detección de anticuerpos anti Trypanosoma vivax mediante la validación del ensayo inmunoenzimático (ELISA-Ac/T. evansi). Estadísticamente, hubo diferencias significativas (P < 0,05) entre los sueros de la región de El Palmar y las otras localidades. Los resultados expresados en porcentajes relativos de positividad (PRP) se ubicaron en un 30% para las tres regiones. 

Palabras Clave: ELISA-Ac/T: evansi; Trypanosoma vivax; Bolívar; PRP.

 INTRODUCCIÓN 

De todas las afecciones de interés biomédico (humano y animal), las enfermedades parasitarias constituyen un grave problema en las regiones tropicales y sub tropicales del mundo (González y Espinoza, 1997). Enfermedades hemoparasitarias de los bovinos, tales como la tripanosomiasis establecen serias limitaciones en la industria ganadera, al obstaculizar una mayor producción de carne, leche y otros productos de origen bovino (Sandoval et al., 1998).

Ante la carencia de una vacuna y las desventajas que presentan los métodos de control hasta ahora conocidos, los estudiosos del tema buscan el control de la enfermedad, basados en tres aspectos: integración con el desarrollo rural, integración con las medidas de control de otras enfermedades (brucelosis, leptospirosis, rabia, etc.) y la integración de varias medidas de control del vector y la tripanosomiasis (Holmes, 1997). 

En tal sentido, en este trabajo tratando de explorar vías de integración, se aprovechó un plan de prevención de la brucelosis bovina por parte del Colegio de Médicos Veterinarios del estado Bolívar, utilizando un cierto número de sueros provenientes de tres localidades del estado a objeto de detectar la presencia de anticuerpos anti Trypanosoma vivax, mediante la validación del ELISA- Ac/T. evansi.

 MATERIALES Y MÉTODOS

 Se utilizaron 142 sueros, recolectados entre 1996 y 1997 de tres localidades del estado Bolívar (Sifontes, El Palmar y Río) procedentes de bovinos adultos, de diferentes razas, cruces y tipo de explotación, manteniéndose sin aditivos a temperatura de -20 a -70 °c en el laboratorio de hemoparásitos de la Universidad Simón Bolívar, hasta el momento de su procesamiento.

 Conociendo las razones que limitan la utilización de sistemas homólogos del ELISA indirecto en el diagnóstico de la tripanosomiasis bovina, ocasionado por T: vivax, se empleó en esta investigación la experiencia acumulada por Desquesnes y Tresse (l996c), Rossi et al. (1993, 1997, 1998) sobre el sistema heterólogo ELISA-Ac/T. evansi, apuntalado en la similaridad antigénica del T: evansi con otro tripanosoma salivario (T: vivax), además de su fácil crecimiento, multiplicación en roedores de laboratorio, altos niveles de parasitemia y respuesta positiva a través de reacciones de PCR a oligonucleotidos específicos de T. brucei (Desquesnes y Espinoza, 1995, Datos no publicados) (Desquesnes y Tresse, 1996d)

El antígeno utilizado en la técnica de ELISA fue preparado con tripanosomas provenientes de ratas Sprague Dawley infectadas experi- mentalmente con Trypanosoma evansi y obtenido en forma pura mediante método convencional (Perrone, 1992). 

Los sueros positivos y negativos se seleccionaron según los criterios de Wright et al. (1993) y Desquesnes y Tresse (1996a). El protocolo del ensayo inmunoenzimático, se efectuó de acuerdo a la literatura (Venkatesan y Wakelin, 1993; Desquesnes y Tresse, 1996b ). Evaluaciones previas al método inmunoenzimático demostraron su especificidad de detección de anti-cuerpos de Trypanosoma sp., en sueros de bovinos y caprinos infectados experimentalmente con T. vivax o T: evansi (Rossi et al., 1995; 1997).

 Los resultados se expresaron tomando el umbral de positividad por encima del nivel promedio de la densidad óptica de los sueros controles negativos (0,2613), más tres veces su desviación estándar (0,398 = punto de corte) y en porcentaje relativo de positividad (PRP = DO de la muestra - DO promedio de muestras negativas/DO promedio muestras positivas -DO promedio muestras negativas), fijándose la línea de corte sobre la base de los resultados de 8 muestras de sueros negativos (5%) + dos desviaciones estándar; 5 + 2 DE = 15% (Desquesnes y Tresse, 1996b), aumentado arbitrariamente a un PRP del 50%, asumiendo las recomendaciones de Wright et al. (1993) y Desquesnes y Tresse (l996a). Para la determinación de diferencias estadísticas entre localidades, se empleó la prueba de Ji cuadrado (Dawson y Trapp, 1997). 

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

 Los resultados del análisis de los sueros bovinos provenientes de las localidades Sifontes, El Palmar y Río, realizados mediante la prueba del ELISA-Ac/T: evansi, se observan en el Cuadro 1. En el total de muestras examinadas, se determinó un promedio de reactores positivos del 42%, cuando se utilizó como punto de corte el promedio del "pool", más tres desviaciones estándar de los sueros negativos seleccionados previamente, correspondiéndole a la localidad El Palmar un porcentaje de serorreaccionantes de 79%. Estadísticamente, hubo diferencias (P < 0,05) entre ésta y el resto de las encuestadas (Cuadro 1). De acuerdo a Sandoval et al. (1998), la anterior seroprevalencia se ubica entre los rangos de una tasa de infección moderada.

  La manifestación de los resultados de los ELISAS indirectos como PRP , es sugerida por los expertos basados en sus distintas ventajas, entre ellas el requerimiento de una simple dilución, la cual se representa en una escala continua de 0 -100 PRP, no asumiéndose paralelismo o un antecedente de actividad uniforme, por lo tanto puede ser usado para estandarizaciones inter-Iaboratorios (Barajas et al., 1993; Wriht et al., 1993).

Cuando los resultados se expresaron en PRP, las muestras consideradas positivas se situaron en un 30% para las tres localidades (Cuadro 2), correspondiendo según Desquesnes y Gardiner (1993) a una situación intermedia de la enfermedad, ya que los sueros positivos fueron menores del 40%. Igualmente, la localidad El Palmar indicó por esta interpretación de los resultados, una mayor seroprevalencia (56%). Estos datos coinciden o son algunas veces superiores a la prevalencia en rumiantes observadas por diversos autores para el resto de las Guayanas del continente suramericano (Desquesnes y Gardiner, 1993; Vokaty et al., 1993).

El incremento arbitrario de la línea de corte del PRP entre sueros negativos y positivos del 50%, se sustentó en el principio que la especificidad de la prueba disminuye cuando la prevalencia es menor, lo cual conduce a un aumento en los resultados falsos positivos y a la prevalencia (24%) presentada para el estado Bolívar por otros investigadores (Toro et al ., 1980; Toro, 1990).

    A pesar del escaso número de muestras examinadas, los datos obtenidos señalaron la importancia de las pruebas serológica (ELISA-Ac/T: evansi) como instrumento de diagnóstico y/o su aplicación en medidas de control de la tripanosomiasis. La anotación de los datos como PRP afina la sensibilidad y especificidad de la prueba al ser más exigentes en el rechazo de diagnósticos falsos positivos.

 SUMMARY

Bovine serums were recollecting during 1996 and 1997 in three regions frorn Bolívar State (Sifontes, El Palmar and Río). These samples were used for the antibody detection anti Trypanosoma vivax, trough immunoenzymatic assay validation (ELISA-Ac/T.evansi). The samples frorn El Palmar region were statically significative (P < 0,05) respect to other two locations. The results expressed in relative percentage of positivity (RPP), were around 30% for the three regions.

KeyWords: ELISA-Ac/T: evansi; Trypanosoma vivax; Bolívar; RPP.

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