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Veterinaria Tropical, 6: 45-57. 1981
AISLAMIENTOS DE Brucella abortus BIOTIPO 1 EN CHIGUIRES VERÓNICA R. DE
LORD*, ANÍBAL BELLO N.*, JAVIER MORENO*,
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RESUMEN Con el propósito de intentar aislamientos de Brucella spp, en 1979 se realizó un estudio en chigüires (Hydrochoerus hydrochaeris) en el Hato Las Trincheras, Estado Apure, Venezuela. Un total de 94 chigüires fueron necropsados y 376 muestras de bazo, hígado y ganglios mesentéricos y retrofaríngeos fueron examinados. Se aislaron diez cepas de Brucella a partir de 49 machos y tres cepas de 45 hembras. Todas las cepas fueron sometidas a la prueba de sensibilidad a colorantes, pero solamente seis resultaron ser Brucella abortus Biotipo I. Así mismo, se determinó la distribución de aislamientos de Brucella de acuerdo a la edad de los animales, la cual fue estimada mediante la técnica del cristalino. La alta proporción de infección (18,8 %) fue encontrada en animales con edades comprendidas entre 11 y 20 meses. Estos hallazgos sugieren que este roedor puede ser considerado de importancia en la transmisión de brucelosis cuando convive con animales domésticos.
La brucelosis es una enfermedad ampliamente distribuida en países en desarrollo y se ha demostrado que numerosas especies de animales silvestres son susceptibles a la infección por diferentes especies del género Brucella 5/26/27/3/2/4/6 existiendo la posibilidad de que algunos de estos animales, convertidos en focos de infección, propaguen la enfermedad a animales domésticos susceptibles 7/8/9. En diversos
países se ha determinado la presencia de anticuerpos y se han aislado
brucelas en animales silvestres, lo que hace que estas especies se
constituyan en reservorio de la enfermedad 13/18/14/10/12/11. En
consecuencia, resulta interesante estudiar la enfermedad en chigüires,
ya que representan una especie ampliamente difundida en Venezuela, donde
conviven con bovinos y búfalos, Este estudio, realizado en 1979, tuvo como objeto muestrear bazo, hígado, ganglios mesentéricos y retrofaríngeos de chigüires, con el propósito de aislar Brucella , y obtener información epizootiológica sobre esta enfermedad en chigüires de los Llanos de Venezuela.
Se estudiaron 376 muestras de bazo, hígado, ganglios mesentéricos y retrofaríngeos de chigüires (Hydrochoerns hydrochaeris), 49 machos y 45 hembras, los cuales fueron sacrificados en el Hato Las Trincheras, Distrito Páez del Estado Apure, mediante la utilización de rifle. EXÁMENES BACTERIOLÓGICOS Los tejidos tomados para intentos de aislamiento de Brucella se procesaron de la siguiente forma: Se lavaron en solución al 0,85% de NaCl y se sembraron en medios de cultivos sólidos adicionados con un 5 % de suero fetal bovino (GIBCO). Los medios de cultivo utilizados fueron Triptosa, Albimi y Kuzdas Morse distribuidos en placa de Petri. CULTIVO DE LAS MUESTRAS Las muestras fueron incubadas a 37°C con una atmósfera de CO2 al 10 %, durante 9 días, con revisiones a partir de las 48 horas de sembradas. IDENTIFICACIÓN DE LOS AISLAMIENTOS La morfología de las colonias fue observada en el microscopio estereoscópico según el método de HENRY (1933). Se consideraron como posibles brucelas todas las colonias observadas con características similares al género Brucella. Se practicó la tinción de Gram (1884) a todas las colonias sospechosas a Brucella. SELECCIÓN
DE COLONIAS PRUEBA DE ACRIFLAVINA. Se utilizó una solución Acuosa 1: 1000 de acriflavina; se tomó una pequeña muestra del cultivo en estudio, colocándola en un porta-objeto donde se emulsionó a fin de observar si se producía o no aglutinación. PRUEBAS DE INUNDACIÓN CON CRISTAL VIOLETA Se utilizó una
solución madre de Cristal Violeta a partir de la cual se preparó una
dilución de 1:40 en agua destilada; se tomaron 5 mI de esta solución
para cubrir una siembra en placa de Petri, durante 30 segundos, con el
fin de observar si las colonias en estudio tenían características
lisas o rugosas. Prueba de la Ureasa Se utilizó la técnica de STUART (1945) para determinar si los organismos aislados tenían o no la capacidad de hidrolizar la urea, tomando amoníaco por acción de la enzima ureasa, lo cual, en caso de positividad, se hace evidente por la aparición de "Un color rosa violáceo. Prueba de Producción de Ácido Sulfídrica (H2S) Se utilizó la prueba de la tira de papel de filtro con Acetato de Plomo (Laboratorio Merck); en tubo de ensayo con medio de cultivo de agar triptosa, sembrando con la cepa aislada, se colocó el papel de filtro y se sometió a incubación durante 5 días, con cambios del papel cada 24 horas, para observar el posible ennegrecimiento del papel, lo cual indicaba que la bacteria en estudio liberaba H2S por acción enzimática sobre los aminoácidos que contienen azufre. Prueba de sensibilidad a diferentes colorantes y reactivos. Con el propósito de biotipificar las trece cepas aisladas se utilizaron los siguientes colorantes y re activos los cuales se adicionaron al medio de cultivo Agar Albimi en las siguientes diluciones: Fucsina Básica Tionina, 1:25000, 1:50000, 1:100 000; Violeta de Metilo, 1: 100000; Safranina, 1: 5000; Verde de Malaquita, 1: 500000. Todos los colorantes se esterilizaron a 100°C durante 1 hora. Eritritol, 1 mg por mI de medio de cultivo;Penicliina; 5 UI por ml de medio de cultivo, ambos fueron utilizados por filtración (HUDDLESON15; RODE et al. 4). Los medios de
cultivos así preparados se repartieron en placas de Petri;
posteriormente se sembraron con suspensiones bacterianas preparadas en
solución al 0,85% de NaCI estéril, manteniendo una densidad
sensiblemente igual, tanto de las cepas en estudio como en las cepas de
referencia (544-2E. abortus, 16 M B. melitensis y 1330 B.
suis) y se incubaron a 37°C durante 72 horas con 10%. Prueba de aglutinación con sueros monoespecificos. Se utilizaron los sueros Anti-A y Anti-M. Se prepararon suspensiones bacterianas con NaCI al 0,85 % y como cepas controles las 544-2 y 16 M. Se hicieron mezclas en un portaobjeto a fin de observar si se producía o no aglutinación perceptible en un minuto. Prueba de
sensibilidad al Fago Tbilisi (Tb).
Se emplearon concentraciones del
Fago Tb la DHP (dosis habitual de prueba) y una suspensión de 104 x
DHP. Esta prueba se realizó con el fin de determinar la norma lítica
que siguen diversas especies de Brucella. Las técnicas y
procedimientos empleados son los descritos por ALTON et al.1.
CARACTERÍSTICAS DE LOS AISLAMIENTOS Las 13 cepas bacterianas aisladas a partir de órganos de chigüires, que se identificaron como Brucella se sometieron a diversas pruebas tendentes a evaluar características coloniales, morfología bacteriana, propiedades bioquímicas, sensibilidad a la presencia de colorantes, sensibilidad al efecto del Fago Tb y aglutinación con sueros monoespecíficos. Los resultados de estos análisis se presentan en los Cuadros 1 y 2. Los resultados que se presentan en el Cuadro 2 muestra los requerimientos de CO2 y suero, así como el comportamiento de las cepas en estudio ante la presencia de diferentes diluciones de colorantes, producción de H2S, producción de Ureasa, reacción con sueros monoespecíficos y sensibilidad a fagos; en base a esas características se identificaron trece cepas como pertenecientes al género Brucella (Figuras 1 y 2). En base al comportamiento bioquímico y serológico se observó que seis de ellas correspondían a B. abortus Biotipo 1; las siete restantes presentaban resultados conflictivos que impedían su interpretación definitiva ya que no se ajustaban a las características de las especies de brucelas clásicas.
Con el propósito de establecer una posible correlación entre la edad de los chigüires y el aislamiento de brucelas, se aplicó la técnica del cristalino mediante la cual se pudo determinar que entre la población examinada se incluyeron animales de 8 hasta 60 meses de edad. En el Cuadro 3 se describen los aislamientos en relación a la edad de los animales infectados. No se aisló bacteria en animales menores de 11 meses, ni en animales con edades comprendidas entre 31 y 40 meses, así como entre 51 y 60 meses. El mayor porcentaje de aislamientos ocurrió en chigüires entre 11 y 20 meses de edad.
Al analizar los resultados obtenidos con el fin de conocer la tasa de infección en los chigüires y su significancia en la cadena de transmisión de la brucelosis, se observó lo siguiente: de los 94 animales muestreados, en los 49 machos la tasa de aislamiento fue de un 10,62 %, mientras que en las hembras resultó en un 3,19 %. Es importante
señalar que de las trece cepas aisladas seis fueron tipificadas como B.
abortus Biotipo I, pero es evidente que se hace necesario probar
nuevamente todas las cepas utilizando otra técnica de biotipificación
más sensible como metabolismo oxidativo, que permita definir con
exactitud el biotipo de las cepas que por presentar resultados
conflictivos no se pudieron tipificar (MEYER y MORGAN 19. Se
conoce que el género Brucella es ureasa positivo, pero
también conocemos que existen cepas atípicas sin actividad ureásica
como es el caso de la cepa de referencia 544-2 B. abortus
(PACHECO y THIAGO DE MELLO 23; SANDERS y WARNER 25),
lo cual hace pensar que corresponden a biotipos diferentes de las cepas
de referencia utilizadas. Tomando en cuenta que la especie estudiada
corresponde a animales silvestres, pudiera ser que se trate de cepas
taxonómicamente diferentes a las ya conocidas (MEYER 20;
MOREIRA-JACOB 21).
In 1979 a study was made of capybara (Hydrochoeros hydrochaeris) from Las Trincheras Ranch, State of Apure, Venezuela, for the purpose of attempting to isolate Brucella spp. A total of 94 capybaras were necropsied and 376 samples of spleen, liver and mesenteric and retropharyngeal lymph nodes were examined. Ten strains of Brucella were isolated from 49 males and three strains were isolated from 45 females. A1I strains were submitted to the stain sensitivity test, but only s ix strains could be tiped as B. abortus Biotype I. Likewise the distribution of the Brucella isolations was determined in relation to the age of the animals as estimated by the lens technique. The highest proportion of infection (18,8%) suggest that this rodent can be considered of importance in the trasmission of brucellosis when living near domestic animals.
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