Veterinaria Tropical 8: 113-123. 1983

COMPORTAMIENTO DE LA VACUNA ANTIAFTOSA A VIRUS VIVO 
ATENUADO POR VÍA NASAL EN BOVINOS

Ada O. de Chaurell*, Elsy Campos*,  Magaly N. de Adrían*, Josefa R. de Domínguez*,
Miriam Espinoza**, Jorge E. Diaz* y Carlos Bernal*

* FONAIAP
Instituto de Investigaciones Veterinarias
 Aptdo. 70. Maracay 2102. Venezuela

** MAC
Dirección General de Desarrollo Ganadero,
Caracas. Venezuela

Recibido: Agosto 16, 1983

RESUMEN

Dieciocho bovinos menores de un año fueron utilizados para probar a nivel de campo la vacuna Antiaftosa Bivalente a virus vivo modificado aplicada por vía intranasal. De acuerdo a los índices de anticuerpos contra el virus 01 de Vallée determinados por la técnica de seroprotección en ratones lactantes, se pudo observar que la inmunorespuesta de los animales inoculados por vía intranasal es similar a la alcanzada por bovinos que son normalmente vacunados por vía intramuscular, aún después de la segunda revacunación.

INTRODUCCIÓN

En trabajos anteriores realizados a nivel de laboratorio, en bovinos, con vacunas antiaftosa a virus vivo atenuado, se demuestra la posibilidad de inmunizar estos animales mediante instilación intranasal (2,6,7).

Trabajos posteriores realizados en Venezuela por el equipo del Instituto de Investigaciones Veterinarias (FONAIAP)  (3) demostraron que la vacunación por instilación intranasal era más efectiva que la inoculación intramuscular cuando se empleaban altas dosis del virus, medidas por índice de seroprotección (5) y por comprobación.

Otro trabajo realizado a continuación (4) demostró, a nivel de laboratorio, que la revacunación por instilación intranasal, aún aplicando 107,5, DL50Rl no estimula significativamente el nivel de anticuerpos en el suero de bovinos.

El presente trabajo describe una experiencia realizada a nivel de campo, comparando la conversión contra el virus 01 en bovinos, inducida por la aplicación de virus vivo atenuado por inoculación intranasal e intramuscular, utilizando la misma vacuna. También fueron aplicadas revacunaciones a los 60 y 120 días post-vacunación. La respuesta inmune fue medida por la técnica de seroprotección. Igualmente se estudió la presencia de anticuerpos anti VIA.

MATERIALES Y MÉTODOS

Vacunas: Se utilizó una vacuna antiaftosa bivalente a virus vivo modificado, lote 041, elaborada en el Instituto de Investigaciones Veterinarias. En la elaboración de esta vacuna se utilizaron partes iguales de vacunas monovalentes de virus 01 Campos con su contenido viral de 107,6 DL50% Rl (2,5 ml) y vacuna monovalente de virus A32 con 106,6 por dosis vacunal (2,5 ml) .Este mismo lote de vacunas fue utilizado en la revacunación, y mantuvo su título infeccioso durante todo el desarrollo de este trabajo de investigación.

Bovinos: Se utilizaron 18 bovinos raza Holstein, no vacunados, menores de 1 año, pertenecientes a la Hacienda La Antonia, ubicada en el Edo. Yaracuy, mantenidos en pastoreo con el resto del rebaño.

Estos animales no presentaron niveles de anticuerpos significativos para los virus utilizados en la vacuna, determinados  por técnicas de seroprotección. Además de que no hubo replicación viral según los resultados de la prueba VIA descrita por ALONSO y col. El lote experimental fue dividido para su estudio en dos grupos: Grupo I: vacunados por vía intranasal y Grupo II: vacunados por vía intramuscular.

Vacunaciones: Los animales de ambos grupos, fueron vacunados a los días 0,60 y 120, empleándose una dosis de 5 ml por vez. En el grupo I se utilizó la vía intranasal, repartiéndose la misma en ambas fosas, mientras que en los animales del grupo II se utilizó la vía intramuscular. 

Detección de niveles de anticuerpos: Para determinar los niveles de anticuerpos, contra el virus 01 Campos, en los animales de ambos grupos, se procedió a realizar sangría cada 30 días, a partir del día 0 hasta los 180 días, mediante tubos Vacutainer.

Las muestras obtenidas fueron conservadas refrigeradas y posteriormente centrifugadas mediante 2.000 r.p.m. durante 20 minutos, para la extracción del suero, procediendo luego a inactivarlo en Baño de María a temperatura de 56 °C durante 30 minutos y conservando en congelación a -20 °C.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

En el Cuadro l están indicados los valores de índices de seroprotección obtenidos en el grupo de bovinos vacunados y revacunados con virus vivo atenuado aplicado por vía intranasal. Se aprecia que la primera revacunación no indujo un efecto "booster". Sin embargo, la segunda aplicación del virus proporciono un considerable aumento del nivel de anticuerpos.

El Cuadro 2 presenta los valores de la evolución de la respuesta inmune en el grupo vacunados, vía intramuscular, semejante a la observada en los bovinos a los que se aplicó el virus vía intranasal, representada por los niveles de anticuerpos.

Los datos del análisis de anticuerpos Anti VIA, en los bovinos a los 0 y 30 días después de vacunados, se recogen en el Cuadro 3, donde se aprecia que prácticamente todos los bovinos vacunados desarrollaron anticuerpos VIA. 

El Gráfico l muestra, en forma comparativa, las curvas de los índices de seroprotección obtenidas en los grupos de bovinos vacunados por vía intranasal e inoculación intramuscular. Se observa que la segunda aplicación del virus, por las dos vías, aumenta considerablemente el nivel de anticuerpos.

En los trabajos realizados anteriormente para determinar la eficacia de la instilación intranasal, para la inmunización de bovinos por esta vía (2,3,6,7) , se observó que para un mayor desarrollo del nivel de anticuerpos era necesario aplicar una elevada dosis de virus. Una sola revacunación no estimula significativamente la formación de anticuerpos medidos por índice de seroprotección.

CUADRO 1. ÍNDICES DE SEROPROTECCIÓN CONTRA EL VIRUS 01 OBTENIDO EN EL SUERO DE LOS BOVINOS VACUNADOS POR INSTILACIÓN INTRANASAL1

Nro. 0 Días  30 Días  60 Días* 90  Días 120  Días* 150  Días 180  Días
0014 0,100 0,580 1,320 1,360 0,160 2,040 0,800
0065 0,260 0,840 1,160 1,980 1,840 3,980 2,800
0071 0,260 0,680 0,840 1,980 2,140 3,980 2,800
0035 0,580 0,740 1,320 1,680 1,840 3,980 2,300
0051 0,940 1,260 1,160 2,320 1,840 3,980 2,800
0039 1,100 2,240 2,930 1,980 2,140 3,980 2,000
0052 1,260 2,240 2,480 1,980 2,480 3,980 2,800
X 0,643 1,226 1,609 1,897 1,77 3,703 2,329
D. S. 0,460 0,726 0,795 0,301 0,751 0,733 0,745
(*) Revacunación por instilación intranasal con la misma vacuna aplicada en la vacunación.

1 Cepa utilizada: 0 cura71 III pase bovino epitelio lingual DIL 1/10.

 

CUADRO 2. ÍNDICES DE SEROPROTECCIÓN CONTRA EL VIRUS 01 OBTENIDO EN EL SUERO DE LOS BOVINOS VACUNADOS POR INSTILACIÓN INTRANASAL1

Nro. 0 Días  30 Días  60 Días* 90  Días 120  Días* 150  Días 180  Días
0059 0,000 0,250 0,840 1,160 0,520 3,980 1,340
0080 0,000 0,980 2,980 1,980 2,480 3,980 2,700
0111 0,100 1,320 0,680 1,980 2,140 3,980 4,000
0036 0,260 0,420 0,840 1,980 2,480 4,820 2,800
0062 0,260 0,000 1,160 1,000 0,480 3,980 1,020
0076 1,420 2,160 2,000 1,980 0,840 3,980 2,700
0073 1,580 2,980 2,320 1,980 2,140 3,980 4,000
0086 0,590 0,860 0,680 1,980 2,140 3,980 3,380
0087 0,580 1,480 0,840 0,570 0,520 3.520 0,700
0048 1,100 0,940 1,840 1,840 1.940 3,520 1,500
0032 1,100 1,420 2,320 1,980 2,160 3,980 2,800
X 0,453 1,347 1,500 1,675 1,613 3,973 2,449
D. S. 0,387 1,014 0,817 0,512 0,834 0,336 0,152
(*) Revacunación por instilación intranasal con la misma vacuna aplicada en la vacunación.

1 Cepa utilizada: 0 cura71 III pase bovino epitelio lingual DIL 1/10.

 

CUADRO 3. RESULTADOS DE DETECCIÓN DE ANTICUERPOS VIA, EN BOVINOS VACUNADOS Y REVACUNADOS CON VIRUS VIVO ATENUADO, POR VAIS INTRANASAL E INTRAMUSCULAR

GRUPO I
Identificación  "0" Días "30" Días
0014 - +
0035 - +
0039 - -
0051 - -
0052 - +
0065 - +
0071 - +
GRUPO II
0032 - +
0036 - +
0048 - +
0059 - +
0062 - +
0073 - +
0076 - +
0080 - +
0087 - +
0111 - +

 

Grafico 1 Medidas de ISP obtenidas en sueros de bovinos vacunados y revacunados por vía intranasal () y vía intramuscular (----), con vacuna antiaftosa a V.V.A. (0 cura7 III pase Bov. Epitelio Lingual, Dil. 1/10)

Grafico 1 Medidas de ISP obtenidas en sueros de bovinos vacunados y revacunados por vía intranasal () y vía intramuscular (----), con vacuna antiaftosa a V.V.A. (0 cura7 III pase Bov. Epitelio Lingual, Dil. 1/10)

Es importante señalar que en los bovinos jóvenes existe una deficiente respuesta inmunitaria ante la aplicación de cualquier vacuna, debido al escaso desarrollo de su sistema inmunitario, dando una inmunidad relativamente corta (±60 días) .La revacunación aquí señalada parece impedir el descenso de estos niveles.

Los datos que se muestran en este trabajo confirman que una revacunación tampoco estimula la formación de anticuerpos con un nivel más alto que el obtenido a la vacunación.

Sin embargo, la segunda revacunación, en ambas aplicaciones, proporcionó una marcada elevación del nivel de anticuerpos.

Las pruebas estadísticas realizadas demostraron que no había diferencias en ningún momento entre los promedios de los niveles de anticuerpos entre las dos vías estudiadas, apreciándose que las dos aplicaciones tuvieron un comportamiento similar, pero teniendo en cuenta que la aplicación intranasal estimula las defensas locales (1,2).

Este fenómeno no fue observado donde se aplicó la vacuna por vía intramuscular; en este sentido la inoculación intranasal sería más ventajosa.

La ausencia de anticuerpos anti VIA a los 0 días indicó que estos animales no habían tenido contacto con virus y la presencia de los mismos en prácticamente todos los animales vacunados con la vacuna a virus vivo atenuado, demostró que sí hubo replicación viral, como consecuencia de la aplicación de esta vacuna.

AGRADECIMIENTO

Los autores agradecen la colaboración del Dr. Albino Alonso en la revisión y corrección de este trabajo; al Dr. Omar Verde por la revisión estadística; al Sr. José Magin Obregón por su ayuda en los cálculos matemáticos ya la Sra. Elisa de Gutiérrez por el trabajo secretarial.

SUMMARY

Eightenn than one year old, were used to test in field condition the modified live virus foot and mouth disease vaccine by intranasal route. According to the antibodies level against 01 Vallée virus determined by the seroprotection technique in suckling mice, it could observed that the inmunoresponse of the inoculated animal by intranasal route is similar to that reached for bovines which are normaly vaccinated by the intramuscular route, even after the second revaccination.

BIBLIOGRAFÍA

1.- ALONSO, F. A, P. AUGE DE MELLO, I. GÓMEZ y F. ROSEMBERG. El uso del antígeno asociado a la infección viral (VIA) en la detección de ganado expuesto al virus de la fiebre aftosa. Bol. Centro Panamericano de Fiebre Aftosa. p. 17-22. 1975.

2.- AUGE DE MELLO, P., I. GÓMEZ y P. SOTMOLLER. virus atenuado de la fiebre aftosa. I. Estudio preliminar sobre la replicación del virus y la respuesta inmunológica de bovinos después de la instilación intranasal de la cepa A24 Cruzeiro (No publicado).

3.- BERNAL, C., J. BALESTRINI, G. CASTRO, M. ESPINOZA, J. M. CASTAÑEDA, A. CHAURELL y M. ADRIÁN. Comparación de las vías intranasal e intramuscular de vacunación con un virus atenuado de fiebre aftosa tipo "0". Bol. Centro Panamericano de Fiebre Aftosa. p. 41-49. 1981.

4.- BERNAL, C. , J. BALESTRINI, E. CAMPOS, M. ESPINOZA, M. de ADRIÁN, A. CHAURELL, J. M. JIMÉNEZ, I. GÓMEZ, K. de FREITAS COSTA  y M. FERREIRA. Vacunación y revacunación intranasal de bovinos con vacuna antiaftosa producida con la cepa atenuada de virus 01 Campos. Bol. Centro Panamericano de Fiebre Aftosa. p. 51-55. 1981.

5.- CUNHA, R. G., J. A. BAPTISTA Jr., U. M. SERRAO e I. TORTURELLA. El uso de los ratones lactantes en la evaluación de los anticuerpos contra el virus de la fiebre aftosa y su significación inmunológica. Gac. Vet. B. Aires, 19 (110) 243-267. 1957.

6.- GOMEZ I. , P. AUGE DE MELLO. Virus atenuado de la fiebre aftosa. III. Crecimiento del virus y respuesta inmunitaria a la instilación intranasal en bovinos de la cepa 01 Campos (No publicado).

7.- ROSEMBERG, F. e I. GOMEZ. Virus atenuado de la fiebre aftosa. II. Crecimiento del virus y respuesta inmunitaria duradera a la aplicación intranasal en bovinos de la cepa A24 Cruzeiro (No publicado) .