Durante 1981, en tres granjas de aves situadas en diferentes localidades del país, se presentó una enfermedad respiratoria con una morbilidad que oscilaba entre el 2 y 40%. De senos infraorbitarios de aves enfermas se aisló un germen que, en TSSA y DAA, formaba colonias hemolíticas e iridiscentes, respectivamente. A las coloraciones de Gram y Giemsa el germen presentaba morfología y coloración bipolar similares a Pasteurella. A las pruebas bioquímicas, estas bacterias se comportan como Pasteurella haemolytica. Cuando se inoculó cada una de las tres cepas aisladas en dos grupos de pollos, se reprodujo la enfermedad, provocando un cuadro respiratorio característico, recuperándose el germen a partir de hisopados tomados de tráquea y hendidura palatina de los pollos inoculados. El germen recuperado se comportó bioquímicamente como una Pasteurella haemolytica, lo cual fue corroborado por el National Veterinary Services Laboratory, en Ames, Iowa, U.S.A. 

INTRODUCCIÓN 

El papel de Pasteurella haemolytica como agente etiológico de enfermedades en las aves es controversial, algunos autores le dan importancia como agente primario y otros lo consideran como un germen secundario. Harbourne (3), en Inglaterra, informó sobre el aislamiento de un Cocobacilo hemolítico de hígados de pollos jóvenes y pavos. Nicolet y Fey (7), en Francia, aislaron cultivos puros de P. haemolytica de pulmones de gallinas jóvenes con salpingitis. Matthes et al. (5), en Alemania, describen infecciones por P. haemolytica en aves, observando desarrollo rápido de la enfermedad con alta morbilidad pero baja mortalidad. 

En 1970, Janetschke et al. (4) aislaron P. haemolytica de pulmones y oviductos de pollos y gallinas con lesiones patológicas en tracto respiratorio, hígado y oviducto, y Hacking et al. (2) obtuvieron aislamientos de este germen en pollonas y gallinas a partir de hígado y sangre del corazón. Estas aves presentaban baja de la postura, aerosaculitis, peritonitis, salpingitis y, en algunos casos, enteritis combinada con hepatitis. 

Mushin et al. (6) aislaron P. haemolytica del tracto respiratorio y otros órganos de aves, que presentaban síntomas clínicos y asintomáticos, y fue de pollos de donde obtuvieron el mayor número de aislamientos en contraste con otras aves como pavos y patos, donde el porcentaje de aislamiento fue bajo. Ellos también reportan la combinación de esta Pasteurella con P. gallinarun y P. multocida. 

En el presente trabajo se reseña el aislamiento de Pasteurella haemolytica en aves, asociada con una enfermedad de tipo respiratorio. 

MATERIALES Y METODOS 

Aves sospechosas

Como fuente de material para la investigación, se tomaron hisopados de senos infraorbitarios de pollos de engorde y gallinas ponedoras con trastornos respiratorios, procedentes de diferentes regiones del país y recibidas en el Laboratorio de Patología Aviar, Sección de Avicultura del Instituto de Investigaciones Veterinarias (I.I.V). La metodología empleada para las siembras bacteriológicas fue la descrita por Bisgaard (1).

Medios de cultivo

Se utilizó Tripticasa soya sangre agar (TSSA), de DIFCO, agar simple de BBL; agar Mac Conkey de BBL; dextrosa almidón agar (DDA), de DIFCO. Caldo infusión de ternera, de DIFCO. Para la identificación del germen aislado se usaron las pruebas bioquímicas descritas por Mushin et al. (6). Para la conservación de cepas se utilizó agar nutritivo al 1%, a temperatura de laboratorio y en oscuridad. 

Animales experimentales

Como animales experimentales fueron utilizados pollos, ratones, cobayos y conejos. Se escogieron pollos de engorde vantress, susceptibles, de seis semanas de edad, las cuales estuvieron en un área de aislamiento del I.I.V. Para cada aislamiento se inocularon seis pollos, tres por la vía intratraqueal (I.T) y tres por la vía intramuscular (I.M), siguiendo la técnica descrita por Mushin et al. (6). Los ratones blancos adultos, suministrados por el Bioterio del I.I.V, fueron también inoculados según la técnica de Mushin et al. (6). Los cobayos, de aproximadamente 250 g de peso, suministrados por el Bioterio del I.I.V,  recibieron inoculación con 0.5 ml de un cultivo de 18 horas en caldo del germen aislado. La vía utilizada fue la I.P. A los conejos adultos, procedentes igualmente del Bioterio del I.I.V, se les inoculó con 1 ml de cultivo en caldo de 18 horas del germen aislado. 

De esas colonias, se hizo subcultivo en agar simple, agar Mac Conkey, dextrosa almidón agar y caldo infusión de ternera, obteniéndose las siguientes características a 37°C: 

Agar simple: No hubo crecimiento en 24 horas. A las 48 horas, escaso desarrollo de colonias de a 2 mm de diámetro, amarillentas, circulares y lisas. 

Agar Mac Conkey: En 24 horas muy escaso desarrollo de colonias lactosas negativas, con un diámetro inferior a 1 mm. A las 48 horas, estas colonias presentaron la característica de lactosas positivas y un diámetro de 1 mm.

Dextrosa almidón agar: Abundantes colonias de 2 a 3 mm de diámetro en 24 horas. Lisas, redondas, traslúcidas y al estereoscopio presentaron una marcada iridiscencia. 

Caldo infusión de ternera: Ligera turbidez uniforme; después de 24 horas, el medio tiende a clarificarse y se forma un depósito granuloso. 

Los resultados obtenidos en las pruebas bioquímicas se compararon con los hallados por Smith (8) y se presentan en el Cuadro 1. 

Los tres aislamientos conservados en agar nutritivo al 1%, a temperatura de laboratorio y en oscuridad. se han mantenido viables durante tres años. Mashin et al. (6) han logrado mantener cepas de P. haemolytica por un año, pero liofilizadas. 

Los pollos inoculados por las vías I.T e I.M, con cada una de las tres cepas aisladas, presentaron síntomas respiratorios (estornudos y flujo nasal) a partir de las 72 horas post-inoculación. De estos pollos se hizo hisopados traqueales, los cuales se sembraron en TSSA, lográndose a las 24 horas desarrollo de colonias betahemolíticas, similares a las descritas en los aislamientos de los materiales originales procedentes de granjas avícolas. 

RESULTADOS 

Caso 1: Gallinas para huevos de consumo, de 30 semanas de edad, procedentes del Estado Aragua, con síntomas respiratorios ( flujo nasal) y una mortalidad del 2%. A la necropsia se observó abceso encapsulado voluminoso y líquido turbio en cavidad abdominal. De los senos infraorbitarios se aisló P. haemolytica. No se aisló Haemophillus gallinarum. A partir del hígado no se aislaron bacterias (Cuadro 2).

Caso 2: Pollos de engorde de ocho semanas de edad, procedentes del Estado Aragua, presentaron secreción nasal y una morbilidad del 20%. A la necropsia se observó secreción mucosa y fuertes hemorragias en tráquea. Congestión pulmonar. Sacos aéreos espumosos y turbios. Hemorragias en músculos pectorales, proventrículo y bursa. De los senos infraorbitarios se aisló P. haemolytica y P. multocida. No se aisló H. gallinarum. En el hígado no hubo desarrollo bacteriano. No se aislaron virus del tracto respiratorio (Cuadro 2). 

Caso 3: Pollos de engorde de seis semanas de edad, con síntomas respiratorios (estornudos y flujo nasal) y una morbilidad del 40%. A la necropsia se observó abundante secreción mucosa en tráquea. Sacos aéreos espumosos, pericarditis y perihepatitis. Caseos en cavidad abdominal y torácica. De los senos infraorbitarios se aisló P. haemolytica. No hubo desarrollo de H. gallinarun. Del hígado se aisló Escherichia coli. No hubo aislamiento de virus del tracto respiratorio. 

De las aves correspondientes a los tres casos descritos anteriormente se tomaron hisopados de senos infraorbitarios, los cuales fueron sembrados según la técnica descrita por Bysgaard (1), usando como medio para aislamiento TSSA en lugar de agar sangre. 

A las 24 horas de incubación, se observaron abundantes colonias, de aproximadamente 1 mm de diámetro, con una clara zona de betahemolisis. La morfología del germen fue cocobacilar con pleomorfismo. Al Gram presentó coloración Gran negativa bipolar. 

Los ratones, cobayos y conejos inoculados no presentaron síntomas ni lesiones visibles. 

De acuerdo a las características morfológicas, tintoriales y bioquímicas de los aislamientos, se puede concluir que el germen aislado es Pasteurella haemolytica. El hecho de no haberse aislado virus respiratorio ni H. gallinarum en las aves problemas y, sobre todo, la reproducción de la enfermedad y el aislamiento únicamente de P. haemolytica en los pollos susceptibles experimentales indican que la P. haemolytica, en los casos descritos, fue la causante de los trastornos respiratorios en las aves afectadas originalmente. 

SUMMARY

During 1981 a respiratory illness with a mortality rate between 2-40% appeared on three poultry farms in different localities in the country. A germ which formed hemolytic and iridescent colonies respectively in TSSA and DDA was isoleted from the infraorbitary sinus of sick birds. After a gram and giemsa staining the germ showed bipolar staining similar to Pasteurella. These bacteria behave like hemolytic Pasteurella on biochemical tests. Inoculating two groups of chickens with each of the three isolate streins, the illness was reproduced displaying characteristic respiretory sings. The germ wAs recovered from the trachea and cleft palate by using tracheal and cleft swabs. The recovered germ behaved biochemically like a Pasteurella haemolytica.

To verify the diagnosis these strains were sent to the National Veterinary Services Laboratories. Ames, Iowa, U.S.A., where they were identified as Pasteurella haemolytica.

BIBLIOGRAFÍA

1. BISGAARD. M. Incidence of Pasteurella haemolytica in the respiratory tract of apparently health chickens and chickens with infections bronchitis. Characterization of 213 strains. Avian Pathol. 6:285-292. 1977.

2. HACKING. W.C. y J.R. PETIT. Pasteurella haemolytica in pullets and laying hens. Avian Dis. 18:483-486. 1974.

3. HARBOURNE. J.F.A. Hemolytic coccobacillus recovered from poultry. Vet.Rec. 74:566. 1962.

4. JANETSCHKE. P. y G. RISK. Frequent occurrence of Pasteurella haemolytica in the domestic chickens in Syria. Monatsh Vet.Med. 25:23-27. 1970.

5. MATTHES. S., H. LOLIGER y H.S. SCHUBERT. Outbreaks of Pasteurella haemolytica infection in fowls. Veterinary Bulletin vol. 39:3220. 1969.

6. MUSHIN. R., Y. WEISMAN y N. SINGER. Pasteurella haemolytica found in the respiratory tract of fowl. Avian Dis. 24:162-168. 1979.

7. NICOLET. J. y H. FEY. Role of Pasteurella haemolytica in Salpingitis of fowl. Schweiz Arch. Tierheilk 107:329-334. 1965.

8. SMITH. J.E. Genus Pasteurella. ln: Buchanan. R.E. and Gibbons. N.E., eds. Bergey's Manual of Determinative Bacteriology. 8th ed. Baltimore. Williams and Wilkins Company. 1974. pp. 370-373.