Veterinaria Trop. 09: 17 - 28  1984

EFECTO DEL ISOMETAMIDIUM (FENANTRIDINA) EN LA INFECCIÓN EXPERIMENTAL POR Trypanosoma evansi (=venezuelense) EN RATAS Y EQUINOS

 M. Toro Benítez*, F. Pallota*, E. León Arenas*, J.A. García* y A. Ruiz*

 * FONAIAP. Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias. 
Instituto de Investigaciones Veterinarias
Apdo. 70, Maracay 2102. Venezuela

RESUMEN

Se realizaron ensayos a fin de conocer la efectividad, profiláctica y/o terapéutica, de la droga Isometamidium contra el Trypanosoma evansi (=venezuelense) en ratas y equinos, infectados en forma experimental. La droga no mostró una completa efectividad contra la infección, observándose además efectos secundarios indeseables en las yeguas tratadas. En 108 ratas infectadas con T. evansi, tratadas con Isometamidium (0,5 a 10,0 mg/kg), se observó un 100% de mortalidad. En yeguas infectadas con T. evansi, tratadas con dosis entre 1,0 y 2,0 mg/kg, vía endovenosa o intramuscular, la droga no fue capaz de eliminar la infección, muriendo cuatro de los animales con signos de la enfermedad. Los resultados difirieron de los hallados por otros investigadores, lo cual podría ser atribuido a las características especificas de las cepas utilizadas.

 INTRODUCCIÓN

En 1958, Wragg et al. (22) obtuvieron un compuesto derivado del fenatridinium, el cual mostró ser activo contra diferentes especies de Trypanosoma. Posteriormente, esta sustancia, denominada Isometamidium, aislada y purificada por Berg (3), fue utilizada con resultados satisfactorios en el control y tratamiento de la tripanosomiasis bovina causada por T. vivax, T. brucei y T. congolense (5, 6, 7, 10, 11, 12, 13, 16, 19, 20). Sin embargo, su utilización en las infecciones causadas por T. evansi (=venezuelense) Steel 1885, agente etiológico de las tripanosomiasis en equinos y caninos, no ha resultado completamente exitosa, siendo los resultados diferentes y contradictorios en las distintas referencias consultadas (1, 4, 8, 14, 15, 17). 

El Isometamidium no ha sido usado en Venezuela y, por consiguiente, se consideró de interés conocer su efectividad contra las infecciones producidas por las cepas venezolanas de T. vivax y T. evansi. Los resultados de ensayos, utilizando la especie T. vivax en ovinos y bovinos, infectados experimentalmente, han sido señalados previamente (18). 

En el presente trabajo se reseñan los resultados obtenidos en ensayos realizados, con el fin de determinar el efecto terapéutico y/o profiláctico del Isometamidium en ratas y equinos infectados en forma experimental con T. evansi. 

MATERIALES Y METODOS 

Ratas

Se utilizaron 108 ratas blancas, adultas, de la raza Wistar, criadas en el Instituto de Investigaciones Veterinarias (CENIAP), las cuales fueron divididas en cuatro subgrupos. El primer subgrupo (39 ratas) fue tratado con Isometamidium (0,5 a 1,0 mg/kg de peso corporal, por vía intramuscular) los días 0, 15, 30 y 60 antes de la exposición. El segundo subgrupo (50 ratas) fue tratado después de la infección y cada rata recibió una dosis única, que osciló entre 0,5 y 10,0 mg/kg. El tercer subgrupo (9 ratas) fue tratado con dosis entre 0,5 y 2,0 mg/kg, recibiendo tres tratamientos a intervalos de 72 horas. El cuarto subgrupo (10 ratas) fue mantenido como control con animales no tratados. Todas las ratas fueron expuestas, por vía intraperitoneal, a dosis de 104 tripanosomas, provenientes de una rata infectada en forma experimental con T. evansi. La parasitemia se midió diariamente mediante el examen de sangre fresca, recolectada de la cola, y las ratas se mantuvieron bajo observación hasta su muerte o recuperación. 

Equinos

Se utilizaron siete yeguas criollas, de cinco a siete años de edad, de las cuales cinco fueron tratadas con dosis de 1,0 a 2,0 mg/kg catorce días después de la infección, y dos fueron mantenidas como controles, no tratados. Todas las yeguas fueron expuestas, por vía endovenosa a dosis de 108 tripanosomas provenientes de una rata infectada experimentalmente con T. evansi. Sangre de la vena yugular se recolectó dos veces a la semana, usando EDTA (2,0 mg/ml), para medir el hematocrito y la parasitemia. Para la detección de tripanosornas en sangre, se utilizaron las técnicas del frotis extendido, la microcentrifugación (21) y la inoculación de ratones. Semanalmente se realizó el examen clínico de los animales y la temperatura rectal se tomó diariamente. Las yeguas fueron mantenidas bajo observación durante 180 días. 

Tripanosomas

Se utilizó una cepa de T. evansi, aislada de un caballo infectado en forma natural, y mantenida en el Laboratorio mediante pasajes en ratones y cobayos desde 1972. La cepa ha mostrado ser altamente infectiva durante todo el tiempo.  

Isometamidium (Trypamicium, Laboratorio Specia, 6 Rue Glisson, 75644 Cedel 13, París, Francia Samorin, Laboratorio May & Baker Ltd., Dagenham, Inglaterra) 

La droga Isometamidiurn se disolvió en agua destilada y se utilizó en concentraciones de 1,0 a 4,0 y de 0,02%, para tratar yeguas y ratas, respectivamente. La ruta intramuscular se utilizó en todos los casos, excepto en una yegua inoculada por vía endovenosa. Los resultados se analizaron y compararon mediante la prueba " t" Student (2). 

RESULTADOS Y DISCUSIÓN 

En el Cuadro 1 se muestran los resultados obtenidos en 108 ratas blancas tratadas, en forma profiláctica o terapéutica, contra la infección experimental por T. evansi. Las ratas tratadas con Isometamidium (0,5 a 1,0 mg/kg), 60, 30, 15 y 0 días antes de la exposición, no fueron protegidas contra la infección, muriendo todas entre 7 y 16 días después de la inoculación. Las ratas tratadas después de la infección, con una dosis única de Isometamidium (0,5 a 4,0 mg/kg) no sanaron y todas murieron entre 11 y 30 días después de la exposición. Las ratas infectadas tratadas con una dosis única de 10,0 mg/kg sobrevivieron un poco más que las otras, pero, sin embargo, todas murieron entre los 50 y 72 días después de infectadas. Todas las ratas infectadas, tratadas con tres dosis de la droga (0,5 a 2,0 mg/kg), a intervalos de 72 horas, murieron entre los 21 y 31 días. Los tripanosomas desaparecieron de la sangre en todas las ratas infectadas, después del tratamiento por periodos que oscilaron entre 3 y 20 días, pero, finalmente, la infección recrudeció y todos los animales murieron. 

CUADRO 1.   Efecto del Isometadimium contra la infección experimental por T. evansi en ratas.

Ratas N° Dosis mg/kg Uso Período prepatente (días) Período sobrevivencia (días) Mortalidad Observaciones
39 0,5 - 1,0 Preventivo 4,0 7 - 16 39/39 Droga suministrada  60, 30, 
15 y 0 días antes de la inoculación
50 0,5 - 10,0 Curativo 4,0 11 - 92 50/50 Dosis única
9 0,5 - 2,0 Curativo 3,5 21 - 31 9/9 Tratamiento tres veces a 
intervalos de 72 horas
10   Controles 4,0 9 - 14 10/10 Controles no tratados
108         108/108  

 

En el Cuadro 2 se muestran los resultados obtenidos en el grupo de yeguas infectadas experimentalmente con T. evansi y tratadas con Isometamidium (1,0 a 2,0 mg/kg). La droga no mostró efectos letales contra los tripanosomas ni fue capaz de eliminar la infección en los animales tratados, en los cuales los hemoflagelados pudieron ser observados o recuperados mediante métodos parasitológicos (microcentrifugación de WOO, inoculación de ratones) durante 120 a 148 días. Todas las yeguas mostraron anemia, caquexia, debilidad, edemas y otros síntomas atribuibles a la acción patógena de los tripanosomas. 

 

CUADRO 2.   Resultados del tratamiento con Isometamidium en yeguas infectadas experimentalmente con T. evansi.

Animal 
N°		 Período prepatente (días) Período patente (días) Dosis 
mg/kg		 Hematocrito % Mortalidad Síntomas clínico
Mínimo Dism. %
2 4 106 - 23,0 40,2 0/2 Caquexia, anemia, aborto
3 4 148 1,0 18,0 50,0 2/3 Caquexia, anemia, aborto
2 4 120 2,0 12,5 63,2 2/2 Caquexia, anemia, debilidad, 
edemas, aborto, diarrea

Dism. % = Disminución relativa porcentual

 

En la Figura 1 se representa la variación del hematocrito (%) en las yeguas tratadas y no tratadas. La disminución porcentual relativa del hematocrito osciló entre 50,0 y 63,2% en las yeguas tratadas, en comparación con un 40,0% observada en los animales controles. No se observó diferencia significativa entre los valores promedios de hematocrito de las yeguas tratadas con 1,0 mg/kg y los animales no tratados (t < 2,365; P = 0,05). Se notó una diferencia significativa entre las yeguas tratadas con 2,0 mg/kg y las no tratadas (t< 2,276; P = 0,05); en este caso, sin embargo, las yeguas controles presentaron mejores condiciones que los animales tratados. De cinco yeguas tratadas, cuatro murieron, mientras que en el grupo control no ocurrieron muertes. Se observaron efectos indeseables, tales como flujo nasal, flatulencia, salivación y postración después de la inoculación de la droga. Sin embargo, estos síntomas desaparecieron aproximadamente dos horas después del tratamiento. 

 

FIGURA 1. Valores promedios de hematocrito en yeguas infectadas experimentalmente con T. evansi y tratadas con Isometamidium. 

FIGURA 1.  Valores promedios de hematocrito en yeguas infectadas experimentalmente con T. evansi y tratadas con Isometamidium. 

 

El uso de Isometamidium contra las infecciones por T. evansi ha sido señalado por otros investigadores con resultados bastante diferentes. Srivastava y Malhotra (17) y Chand y Singh (4) utilizaron el Isometadimium en perros y asnos infectados, en forma experimental, con T. evansi, indicando su efectividad terapéutica con dosis únicas que oscilaron entre 0,5 y 2,0 mg/kg, por vía intramuscular. Raghavan y Khan (15) encontraron que la droga, a una dosis de 2,0 mg/kg tiene un efecto tanto profiláctico como terapéutico contra la infección natural por T. evansi en bovinos y bufalinos. 

Petrovskii (14) informó sobre le curación de camellos infectados en forma natural con T. evansi, usando dosis de 1,0 mg/kg. Por su parte, Balis y Richards (1) afirmaron que debía usarse una dosis de 2,0 mg/kg contra la infección por T. evansi en dromedarios. Sin embargo, Gill (8), en un estudio sobre el efecto de algunas fenantridinas (Protidium, Isometamidium y Suraminato de Isometamidium) en la infección experimental por T. evansi, en ratas y ratones, concluye que estas drogas no presentan ningún efecto sobre esta especie de Trypanosoma.

En este estudio, el Isometamidium usado en dosis de 0,5 a 10,0 mg/kg no resultó completamente efectivo contra las infecciones causadas por T. evansi en ratas y equinos. En el grupo de ratas infectadas con T. evansi y tratadas en forma profiláctica o terapéutica, la mortalidad registrada fue del 100%, sin embargo, los tratamientos curativos extendieron los períodos de sobrevivencia de las ratas en comparación con los controles no tratados. Aparentemente, los tripanosomas desaparecían, no siendo detectados en sangre periférica por períodos que oscilaron entre 3 y 20 días, pero finalmente la infección recrudecía y las ratas morían. 

En las yeguas infectadas con T. evansi, dosis de 1,0 a 2,0 mg/kg, administradas por vía endovenosa o intramuscular, no fueron capaces de eliminar la infección, muriendo cuatro de cinco yeguas con signos de la enfermedad. Estos resultados concuerdan con los informes de Gill (8), pero difieren de los encontrados por otros investigadores, quienes señalan que la droga es efectiva contra la infección por T. evansi en bovinos, búfalos, perros, asnos, camellos y dromedarios. En sus experiencias, Gill (8), Srivastava y Malhotra (17), Chand y Singh (4) y Balis y Richard (1), utilizaron una cepa de laboratorio de T. evansi, mantenida por pasajes seriados en ratas blancas y cobayos; en tanto que Raghavan y Khan (15) y Petrovskii (14) trabajaron con animales infectados en forma natural. En vista de que la especie T. evansi está representada por cepas o xenodemas que difieren tanto en su distribución geográfica, como en el grado de restricción del hospedador (9), es factible que las diferencias observadas pudieran ser atribuidas a las características específicas de cada una de las cepas. 

SUMMARY 

Essays were carried out in order to know the effectivity, either prophylactic or terapeutic, of the drug Isometamidium against Trypanosoma evansi (=venezuelense) in experimentally infected rats and equines. The drug was found to be not completel y effective against infection and, side-effects were noted in treated mares. 

In 108 T. evansi infected rats, treated Isometamidium (0.5 to 10.0 mg/kg) a 100% of mortality was observed. In mares infected by T. evansi and, treated Isometamidium (1.0 to 2.0 mg/kg) either by the intramuscular or intravenous route, the drug was unable to eliminate the infection and, four mares died showing sings of disease. Results widely differed regarding those of others investigators which, may be attributable to specific characteristics of the strains. 

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